青蝦性別相關(guān)分子標(biāo)記的研究.pdf

1、青蝦，學(xué)名為日本沼蝦（Macrobrachium nipponense），是我國重要的淡水養(yǎng)殖蝦類。青蝦雌雄個體之間的生物學(xué)或經(jīng)濟(jì)性狀存在顯著差異，如雄蝦生長速度快于雌蝦，性成熟雄蝦個體明顯大于同齡雌蝦。因此，青蝦的性別控制研究具有重要的學(xué)術(shù)價值和生產(chǎn)意義。本文擬采用DNA分子標(biāo)記技術(shù)分析雌雄青蝦遺傳差異，以篩選性別相關(guān)的標(biāo)記。本文包括以下三個方面：1.青蝦雌雄差異的序列相關(guān)擴(kuò)增多態(tài)性分析（SRAP）分析
　　 采用100對引物

2、對太湖野生青蝦雌性混合模板（♀）和雄性混合模板（♂）分別進(jìn)行SRAP分析。期中27對引物組合擴(kuò)增出30條群體水平性別特異帶，22條為雄性群體特異條帶，占73.3％;8條為雌性群體特異條帶，占26.7％。
　　 擴(kuò)增出群體差異的27對SRAP組合對雌雄個體分別進(jìn)行SRAP擴(kuò)增，其中引物m5e2擴(kuò)增出一條帶，大小為265bp，命名為m5e2-265,30尾雌性個體中有13尾擴(kuò)增出此帶，占43.3％;30尾雄性個體中有5尾擴(kuò)增出此帶，

3、占16.6％。比例為2.6:1(43.3％：16.6％)，顯著偏離1:1，推測該片段對應(yīng)的DNA位點(diǎn)與性別有一定關(guān)聯(lián)，其所對應(yīng)的位點(diǎn)可能位于性別決定基因的相鄰區(qū)域，受性別決定基因的控制。2.青蝦雌雄差異的微衛(wèi)星(SSR)分析
　　 利用9個SSR分子標(biāo)記對太湖野生青蝦雌雄個體進(jìn)行遺傳多樣性分析。共檢測到54個等位基因，每個位點(diǎn)產(chǎn)生的等位基因數(shù)3～12個，平均每個位點(diǎn)產(chǎn)生6個等位基因。各等位基因在雌雄群體中的等位基因頻率均有差異，

4、其中等位基因Mni009-B，Mni001-A,WXMN13-B，E在雌雄群體中的等位基因頻率值差異顯著，分別為♀0.0357:♂0.1833(1:5.13),♀0.2321:♂0.0741(3.13:1),♀0.2500:♂0.0833(3:1),♀0.2292:♂0.0833(2.75:1)，都顯著偏離1:1；等位基因WXMN03-F、G，WXMN04-B、F、H，WXMN11-D僅在少數(shù)雌性個體中出現(xiàn)，WXMN13-A、H,WXM

5、N04-E、J、L僅在少數(shù)雄性個體中出現(xiàn)。以上等位基因很有可能是與性別相關(guān)的等位基因。3.鯉魚AFLP-銀染體系的建立及對青蝦適用性的研究
　　 以建鯉為材料，對擴(kuò)增片斷長度多態(tài)性(AFLP)反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化，建立了適合于鯉魚的AFLP反應(yīng)體系：提取建鯉血細(xì)胞DNA為模板；50μL酶切反應(yīng)物總體積，MseI和EcoRI37℃雙酶切5h效果最佳；10μL預(yù)擴(kuò)體系，引物為E+A和M+C;25μL選擴(kuò)體系，預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋40倍至30n