32P-核酸靶向治療H22肝癌小鼠移植瘤的研究.pdf

1、目的：肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，其死亡率在我國排第二位。手術(shù)切除是早期肝癌治療的首選方法，但多數(shù)患者確診時(shí)已處于局部進(jìn)展期或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，且我國肝癌患者多伴有慢性肝炎、肝硬化，肝臟功能較差、并發(fā)癥常見，因此多數(shù)患者不能滿足手術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，總體預(yù)后較差。同位素內(nèi)放療適應(yīng)癥廣、可直達(dá)病灶、持續(xù)低流量照射，安全性好，可重復(fù)治療，在肝癌治療領(lǐng)域存在獨(dú)特優(yōu)勢，125I、90Yi、32P等同位素治療肝癌的基礎(chǔ)及臨床研究均顯示出明確的效果，存在廣闊

2、的發(fā)展前景。32P是一種較為理想的局部放療同位素，其在衰變過程在產(chǎn)生的β射線對腫瘤細(xì)胞具有明確殺傷作用，半衰期14.26天，能夠提供低劑量持續(xù)照射，且射程較短，對正常組織損傷小。目前臨床32P治療肝癌的給藥方法以32P-玻璃微球介入為主，雖然存在一定療效，但藥物難以進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)，藥效有所損失，且肝癌介入治療本身存在嚴(yán)格適應(yīng)癥，將部分患者拒之門外。
　　孔彥平等的研究顯示：肝癌細(xì)胞無需轉(zhuǎn)染劑的幫助可以直接從微環(huán)境中內(nèi)吞攝取脫氧核糖

3、核酸（DNA）大片段，而正常細(xì)胞則無此功能。利用肝癌細(xì)胞的這一特性，將32P標(biāo)記過的DNA大片段制成ISONA，其實(shí)質(zhì)是借助大分子DNA這一載體將放射性32P攜帶進(jìn)入癌細(xì)胞內(nèi)，實(shí)現(xiàn)其靶向抑瘤作用。理論上說，ISONA與傳統(tǒng)同位素治療肝癌方法相比，適應(yīng)癥更廣，操作更為簡便，靶向性更佳，安全性更好。
　　本實(shí)驗(yàn)將從動(dòng)物水平探究ISONA的抑瘤作用，觀察ISONA對荷瘤小鼠生存時(shí)間的影響，為ISONA應(yīng)用于肝癌臨床治療提供理論依據(jù)。

4、r>　　方法：
　　1.抑瘤實(shí)驗(yàn)
　　建立H22肝癌細(xì)胞小鼠皮下移植瘤模型并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組：按隨機(jī)數(shù)字表法分為：對照組（C組）、ISONA高劑量組（IH組）、ISONA低劑量組(IL組)、游離32P組（P組）。C組經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水0.5ml，IH組經(jīng)尾靜脈注射劑量為90微居的ISONA溶液0.5ml，IL組經(jīng)尾靜脈注射劑量為30微居的ISONA溶液0.5ml，P組經(jīng)尾靜脈注射劑量為30微居的游離32P溶液0.5ml。于處理

5、當(dāng)日、1、3、5、7日后分別測量小鼠皮下移植瘤長、短徑，計(jì)算腫瘤體積及腫瘤生長抑制率，并繪制腫瘤生長曲線。于處理當(dāng)日、處理7日后分別測量小鼠體重，處理后7日處死小鼠，完整剝離腫瘤組織并稱取瘤重，計(jì)算腫瘤抑瘤率，同時(shí)摘取小鼠脾臟稱重，計(jì)算小鼠脾臟指數(shù)，觀察不同處理對免疫器官的影響。
　　2.生存實(shí)驗(yàn)
　　建立H22肝癌小鼠腹水移植瘤模型并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組：按隨機(jī)數(shù)字表法分為：對照組（C組）、ISONA組（I組）、游離32P（P組）

6、。C組腹腔注射生理鹽水0.5ml，I組腹腔注射劑量為100微居的ISONA溶液0.5ml, P組腹腔注射放射劑量為100微居的游離32P溶液0.5ml，等待小鼠自然死亡，記錄各組小鼠生存時(shí)間并繪制生存曲線，計(jì)算生命延長率。
　　3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　運(yùn)用SPSS21.0軟件對計(jì)量資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組指標(biāo)均數(shù)比較采用單因素方差分析檢驗(yàn)，各組荷瘤小鼠生存分析采用Kaplan-Meier法。以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　

7、　結(jié)果：
　　1抑瘤實(shí)驗(yàn)：
　　1)小鼠H22肝癌皮下移植瘤成瘤率為100％。
　　2)體重變化：處理前各組小鼠體重經(jīng)方差分析無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。處理后第7天(d7)C組、IH組、IL組、P組體重分別為：(37.64±2．06)g，(28.97±2.06)g，(32．73±2.11)g，(36．52±2.34)g，經(jīng)方差分析顯示IH組與C組、IL組與C組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，P組與C組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

8、(P>0.05)。
　　3)處理前各組腫瘤體積經(jīng)方差分析無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，經(jīng)不同處理7天后，C組、IH組、IL組、P組小鼠移植瘤積分別為：(4420±494)mm3、(2187±203)mm3、(3624±449)mm3、(4270±376)mm3，方差分析結(jié)果顯示IH組、IL組、腫瘤體積均小于C組，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，其中，IH組腫瘤體積小于IL組（P<0.05)， P組與C組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05)。

9、>　　4)處理前各組瘤重經(jīng)方差分析無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，處理后第7天C組、IH組、IL組、P組小鼠移植瘤瘤重分別為：(6.236±0.838)g、(3.053±0.451)g、(5.172±0.607)g、(6.027±0.382)g，方差分析結(jié)果顯示IH組、IL組瘤重均小于C組，差異顯著(P<0.05)，其中，IH組腫瘤體積小于IL組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)，P組與C組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05)。抑瘤率依據(jù)瘤重計(jì)算：IH組51

10、.4%；IL組：17.6%；P組：3.4%。
　　5)脾指數(shù)：P組脾指數(shù)較C組下降，IH組及IL組與C組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.生存實(shí)驗(yàn)：C組、I組、P組小鼠平均生存時(shí)間分別為（9.30±4.79）天、（15.00±6.71）天、（8.20±4.37天），I組、P組小鼠生命延長率分別為61.29%和-11.83%。I組平均存活時(shí)間比C組長，差距有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；P組平均存活時(shí)間與C組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.