ICU鮑曼不動(dòng)桿菌流行病學(xué)、耐藥基因及整合子的研究.pdf

1、目的：
　?、帕私馍穷^大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科(ICU）病人分離的鮑曼不動(dòng)桿菌（Acinetobacter baumannii）的流行病學(xué)特點(diǎn)及耐藥現(xiàn)狀。⑵了解ICU鮑曼不動(dòng)桿菌所攜帶的耐藥基因以及相關(guān)的耐藥機(jī)制。⑶了解ICU鮑曼不動(dòng)桿菌 I類整合子與插入序列共同區(qū)（Insertion Sequences Common Regions，ISCRs）元件的檢出情況以及其二者與抗菌藥物及耐藥基因的相關(guān)性。
　　方法：

2、r>　?、龠\(yùn)用vitek2 compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏分析系統(tǒng)鑒定本院ICU病人所分離的鮑曼不動(dòng)桿菌并檢測(cè)抗菌藥物敏感性，運(yùn)用WHONET軟件對(duì)耐藥率及流行病學(xué)數(shù)據(jù)作統(tǒng)計(jì)及分析。②應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)技術(shù)檢測(cè)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶基因（ESBLs）：blaTEM-1、blaSHV、blaADC；碳青霉烯類耐藥基因：blaIMP、blaVIM-2、blaNDM-1、blaOXA

3、23、blaOXA24、blaOXA51、blaOXA58；氨基糖苷類修飾酶基因；aph(3’)-I, aac(6’)-Ib, ant(3”)-I；16s rRNA甲基化酶基因：armA。以及運(yùn)用腸桿菌科重復(fù)序列PCR（Enterbacteriat Repetitive Intergenic Consensus，ERIC-PCR）技術(shù)分析95株鮑曼不動(dòng)桿菌的克隆同源性，并運(yùn)用卡方檢驗(yàn)分析耐藥基因與耐藥表型間的關(guān)系。③運(yùn)用PCR技術(shù)、限制

4、性片段長(zhǎng)度多態(tài)性-PCR分析(restriction fragment length polymorphism，RFLP-PCR)技術(shù)結(jié)合DNA測(cè)序技術(shù)分析鮑曼不動(dòng)桿菌I類整合子及ISCR1元件的攜帶率以及其二者可變區(qū)所攜帶的耐藥基因，并運(yùn)用卡方檢驗(yàn)分析I類整合子陽(yáng)性菌株與陰性菌株耐藥率的差異。
　　結(jié)果：
　　⑴分離出菌株的標(biāo)本以痰液為主，占95.78％；病人年齡層分布以60歲以上占多數(shù)；在2015年內(nèi)平均每月均有≥3例非

5、重復(fù)的鮑曼不動(dòng)桿菌的檢出；除外個(gè)別病床外，在2015年內(nèi)各病床均有至少3例的非重復(fù)鮑曼不動(dòng)桿菌的檢出。⑵鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)頭孢吡肟和頭孢曲松的耐藥率分別為93.68%和92.63%；對(duì)慶大霉素和妥布霉素的耐藥率分別為89.47%和86.32%；環(huán)丙沙星的耐藥率為95.74%，對(duì)左氧氟沙星耐藥率為53.19%，其有38.3%的中介比例。對(duì)碳青霉烯類抗菌藥物亞胺培南的耐藥率高達(dá)92.63%；替加環(huán)素耐藥率為41.30%，復(fù)方新諾明耐藥率為81.

6、05%。⑶blaTEM-1基因的攜帶率為91.58%，而blaADC基因的檢出率為100.00%；所有的菌株均攜帶有blaOXA51基因（100.00%）；檢測(cè)出共有88株菌攜帶有blaOXA23基因（92.63%）；而blaOXA24、blaOXA58、blaIMP、blaVIM-2和blaNDM-1基因并未在本研究菌株中檢出；16s rRNA甲基化酶基因armA的檢出率為88.42%；其次為aph(3’)-I基因，攜帶率為86.32

7、%；ant(3”)-I基因檢出率為30.53%；25株鮑曼不動(dòng)桿菌攜帶有aac(6')-Ib基因（26.32%）。Ⅱ.耐藥基因間相關(guān)性：blaOXA23與blaTEM-1、ant(3”)-I與aac(6')-Ib基因間相關(guān)性較大。⑷將菌株分為10個(gè)克隆型，其中90.52%的菌株為克隆型A，此型為本院ICU內(nèi)主要的流行克隆型。⑸菌株I類整合子及ISCR1元件攜帶情況：I類整合子攜帶率為29.47%；ISCR1元件的攜帶率為27.37%。⑹

8、可變區(qū)耐藥基因攜帶情況：I類整合子可變區(qū)基因攜帶率為100.00%；ISCR1元件可變區(qū)未檢測(cè)出有耐藥基因。共擴(kuò)增出兩種長(zhǎng)度的可變區(qū)，所檢測(cè)出的耐藥性基因組合分別為aacA4-catB8-aadA1以及aacC1-OrfX-OrfX-aadA1。
　　結(jié)論：
　?、買CU分離的鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)多種抗菌藥物呈現(xiàn)較高的耐藥率。②鮑曼不動(dòng)桿菌攜帶 blaTEM-1基因與 blaOXA23基因是導(dǎo)致菌株分別對(duì)頭孢菌素類抗菌藥物耐藥以及

9、亞胺培南耐藥的主要基因，但不是唯一的決定基因。氨基糖苷類修飾酶基因aph(3’)-I及16s rRNA甲基化酶基因armA分別與菌株對(duì)氨基糖苷類藥物耐藥的相關(guān)性較大。基因blaOXA23-blaTEM-1-armA-aph(3’)-I組合是本院鮑曼不動(dòng)桿菌的主要流行基因組合類型，具有流行播散的優(yōu)勢(shì)。③I類整合子及ISCR1元件呈串聯(lián)形式存在于鮑曼不動(dòng)桿菌中，增加耐藥基因聚集能力以及傳播能力，在菌株快速獲得耐藥性的同時(shí)使菌株的耐藥機(jī)制更加