醫(yī)院鮑曼不動桿菌感染的分子流行病學調(diào)查及耐藥機制研究.pdf

1、背景和目的：
　　 鮑曼不動桿菌(AB)是重要的院內(nèi)感染病原菌之一,常表現(xiàn)為多重耐藥,易引起醫(yī)院獲得性肺炎、菌血癥、泌尿系統(tǒng)感染、腦膜炎、軟組織感染及腹腔內(nèi)感染等嚴重感染,臨床治療面臨嚴峻的挑戰(zhàn)。因此加強對其耐藥性監(jiān)測,研究其耐藥分子機制,對于控制和治療鮑曼不動桿菌引起的醫(yī)院內(nèi)感染具有重要的現(xiàn)實意義。
　　 本研究監(jiān)測四年間鮑曼不動桿菌的臨床分布特點和耐藥性變遷,篩選多重耐藥菌株,分析其同源性,測定主要的β-內(nèi)酰胺酶基因

2、型,分析產(chǎn)金屬酶SIM-1菌株的整合子結(jié)構,明確我院鮑曼不動桿菌的耐藥性、克隆相關性及主要的碳青霉烯酶基因型。
　　 材料和方法：
　　 1.收集我院2004年7月～2008年6月臨床分離的1370株鮑曼不動桿菌,應用VITEK-32型全自動微生物分析系統(tǒng)進行菌種鑒定和藥敏試驗,部分藥物采用K-B法進行藥敏試驗,應用WHONET5.4軟件對菌株和藥敏數(shù)據(jù)進行分析,經(jīng)SPSS13.0軟件用χ2檢驗對細菌耐藥率進行分析。

3、r>　　 2.收集我院2008年10月～2009年6月臨床分離的33株多重耐藥鮑曼不動桿菌(MDRAB),應用VITEK-32型全自動微生物分析系統(tǒng)進行菌種鑒定,采用瓊脂稀釋法測定12種抗菌藥物的最低抑菌濃度(MIC)值,脈沖場凝膠電泳(PFGE)分析菌株的同源性,PCR擴增和產(chǎn)物序列分析明確主要的碳青霉烯酶和A類β-內(nèi)酰胺酶基因型。
　　 3.選取上述33株MDRAB中的1株碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌(CRAB),采用E t

4、est法測定12種藥物的MIC值,三維試驗檢測β-內(nèi)酰胺酶表型,PCR法擴增和產(chǎn)物序列分析主要的碳青霉烯酶基因和整合子基因盒,堿裂解法抽提質(zhì)粒,接合和轉(zhuǎn)化試驗檢測耐藥性的傳遞。
　　 結(jié)果：
　　 1.2004年7月～2008年6月四年間我院臨床分離的鮑曼不動桿菌占所有分離病原菌(包括革蘭陰性菌、革蘭陽性菌和真菌)的10.23％(1370/13398),2004-2005年度、2005-2006年度、2006-2007年

5、度和2007-2008年度其檢出率分別位居第三位、第四位、第五位和第三位,表明該菌是院內(nèi)感染的常見病原菌之一。
　　 2.從標本分布特點來看,歷年來各類標本的檢出率無明顯差異,總體上以痰液最多且占絕對優(yōu)勢(87.74％),其次為分泌物(3.36％),其它標本只占少數(shù)。從臨床科室分布情況來看,歷年來不同科室的檢出率無明顯差異,總體上以監(jiān)護病房最多(63.58％),其次為神經(jīng)內(nèi)科(9.20％)、神經(jīng)外科(8.61％)和呼吸內(nèi)科(5.

6、11％),存在明顯的科室集中趨勢。
　　 3.1370株鮑曼不動桿菌對17種常用抗菌藥物的敏感率都不高,只有阿米卡星(79.31％)、亞胺培南(58.58％)和氨芐西林/舒巴坦(53.50％)三種藥物的敏感率在50％以上,而氨芐西林、呋喃妥因、頭孢曲松、頭孢替坦和頭孢唑啉五種抗菌藥物的耐藥率均接近100％。2004年～2008年鮑曼不動桿菌對亞胺培南和左旋氧氟沙星的耐藥率呈逐年上升趨勢,且上升幅度較大。
　　 4.200

7、8年10月～2009年6月臨床分離的33株MDRAB的標本來源以痰液最多見(84.8％),且在監(jiān)護病房檢出最多(51.52％)；對12種常用抗菌藥物的藥敏結(jié)果顯示,米諾環(huán)素的耐藥率最低(0),其次為多粘菌素B(39.4％),其它藥物的耐藥率均在75％以上,其中對革蘭陰性菌具有強大抗菌活性的亞胺培南和美羅培南的耐藥率達90.9％。
　　 5.33株MDRAB根據(jù)PFGE條帶分析發(fā)現(xiàn)其中30株屬于主要的流行克隆株A,并且可分為A1、

8、A2和A3共3個亞克隆,分布于7個不同的臨床科室；另有3株為散發(fā)克隆株B、C和D。
　　 6.33株MDRAB中有31株擴增出blaOXA-51組基因,通過測序確認為blaOXA-66基因；30株擴增出blaOXA-23組基因,通過測序確認為blaOXA-23基因；1株擴增出blaSIM-1基因,通過測序確認為blaSIM-1基因。未檢測出blaOXA-24組、blaOXA-58組和blalMP型、blaVIM型基因。2株b/a

9、OXA-51組基因陰性菌株經(jīng)PCR擴增16S-23SrRNA基因,通過測序確認1株為Acinetobacterbaylyi,1株為不動桿菌基因種型3。ISAbal/OXA-23陽性28株,ISAbal位于OXA-23基因上游34bp。未檢測出ISAbal/OXA-66陽性菌株。
　　 7.33株MDRAB中有29株擴增出blaTEM型基因,通過測序確認為blaTEM-1基因。未檢測到blaSHV、blaPER、blaCTX-M-

10、1、blaCTX-M-2、blaCTX-M-9、blaVEB、blaGES和blaKPC型基因。
　　 8.1株Acinetobacter baylyi為產(chǎn)金屬酶SIM-1菌株,同時產(chǎn)OXA-23酶,且ISAbal/OXA-23陽性,ISAbal位于OXA-23基因上游34bp。未檢測出blaOXA-51組、blaOXA-24組、blaOXA-58組和blaIMP型、blaVIM型基因,同時A類β-內(nèi)酰胺酶TEM、SHV、PER

11、、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9、VEB、GES和KPC亦陰性。
　　 9.blaSIM-1基因位于Ⅰ類整合子上,該整合子包含四個耐藥基因盒blaSIM-1、arr-3、catB3和aadAl。
　　 結(jié)論：
　　 我院鮑曼不動桿菌的臨床分離率較高,多重耐藥現(xiàn)象嚴重且存在同一克隆株的播散流行；MDRAB可產(chǎn)生多種β-內(nèi)酰胺酶:OXA-23、OXA-66、TEM-1和SIM-1,并且插入序列ISAb