姜黃素誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞的凋亡機(jī)制研究.pdf

1、本論文通過研究姜黃素(curcumin)對(duì)人肺腺癌細(xì)胞的作用，揭示了該化合物對(duì)肺腺癌細(xì)胞的抑制作用和作用機(jī)理，為后續(xù)的臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化研究打下了基礎(chǔ)。
　　肺癌是一種惡性程度很高的腫瘤，在全球范圍內(nèi)都存在很高的發(fā)病率和死亡率，嚴(yán)重威脅著人們的生命健康。在我國(guó)，因罹患肺癌而產(chǎn)生的死亡率也是位居所有惡性腫瘤的首位，也是目前腫瘤研究者研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。然而對(duì)于肺癌的治療，近些年的療效并沒有明顯的改善，患者的5年生存期仍然很低，患者的預(yù)后還是

2、很差，生活質(zhì)量很低。為此，臨床醫(yī)生和基礎(chǔ)科研工作者都致力于尋找更為有效的藥物。
　　通常，肺癌可以分為非小細(xì)胞肺癌和小細(xì)胞癌，而其中以非小細(xì)胞肺癌為主，占肺癌總?cè)藬?shù)的80％。而非小細(xì)胞肺癌又可以分為大細(xì)胞肺癌、腺癌和鱗癌，其中腺癌又占據(jù)絕大多數(shù)的非小細(xì)胞肺癌的比例，因此在研究非小細(xì)胞肺癌臨床診斷治療方針的時(shí)候，多選擇以肺腺癌為研究對(duì)象。
　　姜黃素(curcumin)，是一種天然的酚類物質(zhì)，其具有強(qiáng)還原性。目前市面上的姜黃素

3、主要來源是從一些植物的內(nèi)部提取出來，通過化學(xué)純化得到純品的姜黃素。姜科、天南星科這樣的一些植物都存在姜黃素的有效成分，獲取也較為容易，人們通常就是通過提取這些植物的根莖來獲取姜黃素。目前的醫(yī)學(xué)研究表明，中藥姜黃素在臨床治療上具有十分重要的功能，其中不乏降血脂、抗腫瘤等一系列特殊的作用。根據(jù)目前數(shù)據(jù)庫收攬的文獻(xiàn)查閱可知，姜黃素已經(jīng)被報(bào)道可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，同時(shí)姜黃素也能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生明顯的細(xì)胞凋亡，其潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值可見一斑，但是

4、這些文獻(xiàn)報(bào)道都只是停留在粗淺的細(xì)胞表型上，并沒有對(duì)細(xì)胞增殖信號(hào)通路以及細(xì)胞凋亡的經(jīng)典途徑進(jìn)行更深層次的剖析和解釋，因此對(duì)臨床上更進(jìn)一步的應(yīng)用姜黃素帶來了一定的困擾，其作用與腫瘤細(xì)胞的具體機(jī)制究竟是什么？目前尚無明確的報(bào)道。為此，希望研究姜黃素對(duì)于人肺腺癌細(xì)胞的生物學(xué)作用已經(jīng)藥物毒理性，深入了解姜黃素是否具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　首先，利用檢測(cè)細(xì)胞活性的方法，即MTS實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)姜黃素能夠抑制對(duì)人肺腺癌細(xì)胞A549和SPC-A-1

5、增殖，而且這種抑制作用呈現(xiàn)明顯的姜黃素毒性劑量-作用時(shí)間依賴關(guān)系。另外一方面，為了研究姜黃素對(duì)于人肺腺癌細(xì)胞是否具有誘導(dǎo)凋亡的功能，于是采用了較為普遍的流式凋亡細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)，即AnnexinⅤ-FITC/7-AAD雙染檢測(cè)凋亡細(xì)胞率。
　　結(jié)果顯示，姜黃素刺激A549和SPC-A-1細(xì)胞之后，兩株細(xì)胞均表現(xiàn)出了明顯的凋亡，而且這種細(xì)胞凋亡呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。即高濃度的姜黃素會(huì)產(chǎn)生更多的細(xì)胞凋亡。接著，為了深入研究姜黃素誘導(dǎo)肺腺

6、癌細(xì)胞凋亡的具體分子機(jī)制，關(guān)注了PI3K/Akt信號(hào)通路下游分子的變化，利用western blot檢測(cè)了與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)線粒體凋亡信號(hào)通路中的caspase信號(hào)蛋白，姜黃素5和10μM組作用A549和SPC-A-1細(xì)胞48h后，而CYP1A2、Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白表達(dá)量均降低，而觸發(fā)凋亡的cleaved-Caspase-9、cleaved-Caspase-3、cleaved-PARP及Cytochro

7、me C蛋白表達(dá)量均增加，這一系列的結(jié)果提示姜黃素誘導(dǎo)A549和SPC-A-1細(xì)胞凋亡的機(jī)制是通過線粒體凋亡信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。
　　總的來說，本文的研究表明了中藥姜黃素對(duì)于人肺腺癌細(xì)胞具有一定的殺傷能力。其不僅能夠抑制肺腺癌細(xì)胞的增殖，而且還能夠誘導(dǎo)明顯的細(xì)胞凋亡。更深層次的，筆者發(fā)現(xiàn)了姜黃素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的具體機(jī)制是通過抑制磷酸化Akt，激活下游線粒體凋亡信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn)的。
　　本研究展示了姜黃素對(duì)于肺腺癌細(xì)胞的作用，同時(shí)在P