不同品系大鼠糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松模型研究.pdf

1、目的：
　　1.比較近交系和封閉群wistar大鼠糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松（GIOP）的成模效應，探討以近交系wistar大鼠制備GIOP模型的可行性。
　　2.基于GIOP大鼠考察糖皮質(zhì)激素對骨髓細胞誘導分化能力的影響，探討糖皮質(zhì)激素誘導GIOP的發(fā)生機制。
　　3.探討阿魏酸鈉對大鼠GIOP的治療作用。
　　方法：
　　1.動物分組：① GIOP造模實驗：SPF級雌性3月齡近交系和封閉群wistar大鼠各3

2、2只，隨機各均分為4組：對照（C）組、低頻（L）組、中頻（M）組和高頻（H）組。②阿魏酸鈉治療實驗：SPF級3月齡封閉群wistar大鼠30只，隨機均分5組：對照（A-C）組、模型(A-G）組、阿魏酸鈉低劑量（A-L）組、阿魏酸鈉中劑量（A-M）組和阿魏酸鈉高劑量（A-H）組。
　　2.給藥：①GIOP造模實驗：C組以N.S肌注3次/w；L、M、H組分別予以Dex1mg/kg肌注、1、3、5次/w，共90d。②阿魏酸鈉治療實驗：A

3、-C組以N.S肌注3次/w；其余各組分別肌注Dex1mg/kg、5次/w，共90d，再停藥10d后，A-G組肌注N.S20d；A-L組、A-M組和A-H組分別肌注阿魏酸鈉20 mg/kg/d、40 mg/kg/d、80mg/kg/d，共20d。大鼠處死前間隔10d分別以鈣黃綠素作雙熒光標記。
　　3.骨組織形態(tài)計量學測定：取左側(cè)脛骨上段，進行不脫鈣骨組織包埋，用骨組織形態(tài)計量學方法測量靜態(tài)參數(shù)、動態(tài)參數(shù)、成骨細胞和破骨細胞參數(shù)以及

4、及生長板參數(shù)。
　　4.骨生物力學測定：取左側(cè)股骨測量長度并進行三點彎曲試驗；取第五腰椎進行壓縮試驗，分別測量最大載荷、最大應力、彈性載荷、斷裂吸收量。
　　5.全骨髓細胞培養(yǎng)及分化誘導：取右股骨作全骨髓細胞培養(yǎng)，采用貼壁篩選法分離單核細胞后，誘導懸浮單核細胞向破骨細胞（OC）定向分化，并以抗酒石酸性磷酸酶染色法鑒定和檢測OC；用牛骨片骨吸收陷窩法檢測OC骨吸收功能，用油紅染色法檢測骨髓細胞中的脂肪細胞數(shù)。
　　結(jié)果：

5、
　　1.近交系wistar大鼠 GIOP造模：①體重平均增長率：C組和L組為正增長。M組和 H組為負增長。②靜態(tài)參數(shù)：與 C組相比，L、M、H組骨小梁面積(％Tb.AT)、骨小梁寬度(Tb.Th)、骨小梁數(shù)量(Tb.N)和骨小梁分離度(Tb.Sp)都沒有明顯變化。③動態(tài)參數(shù)，與C、L和M相比，H組MAR、%L.Pm、BFR/TV、BFR/BV和BFR/BS明顯減小。④成骨細胞和破骨細胞參數(shù)，與C組相比，L組破骨細胞貼壁周長百分數(shù)

6、（%Oc.S/BS）顯著減少；M組單位骨組織破骨細胞百分數(shù)（Oc.N/BS）和%Oc.S/BS顯著減少；H組單位Ob.N/BS、%Ob.S/BS和%Oc.S/BS顯著減少。與L組相比，M組%Ob.S/BS和Oc.N/BS顯著減少； H組Ob.N/BS和%Ob.S/BS顯著減少，與M組相比，H組Ob.N/BS和%Ob.S/BS顯著減少。⑤生長板參數(shù)：生長板寬（G.P.Wi）與C組相比，M組和H組明顯減??；與L組相比，M組和H組明顯減小。退

7、行細胞高度（D.C.H）與C組相比，L組明顯增大；M、H組沒有顯著變化。⑥三點彎曲試驗參數(shù)：與C組相比，L組最大載荷和彈性載荷明顯降低；M組最大載荷明顯降低、最大載荷和股骨長度明顯減??；H組最大載荷、彈性載荷和股骨長度明顯降低，最大應力和斷裂吸收量明顯減小。與L組相比，M組股骨長度明顯減??；H組最大載荷、最大應力、彈性載荷、斷裂吸收量和股骨長度明顯減小。與M組相比，H組最大載荷和股骨長度明顯減小。⑦壓縮試驗參數(shù)，與C組相比，H組斷裂吸收

8、量和骨材料韌性明顯減小。與L組相比，H組斷裂吸收量明顯減小。
　　2.封閉群wistar大鼠 GIOP造模：①體重平均增長率：C、L和M組為正增長，H組為負增長。②靜態(tài)參數(shù)：與C組相比，M組Tb.N明顯減少、H組%Tb.AT、Tb.N和Tb.Th明顯減少；與L組相比，M組%Tb.AT和Tb.N明顯減小、Tb.Sp明顯增大、Tb.N明顯減少；H組%Tb.AT、Tb.N和Tb.Th明顯減小、Tb．Sp明顯增大；與M組相比，H組Tb.T

9、h明顯減少。③動態(tài)參數(shù)：與C組相比，H組MAR、%L.Pm、BFR/TV、BFR/BV和BFR/BS明顯減小，與L組相比，M組和H組 MAR、BFR/TV、 BFR/BV和 BFR/BS明顯減小。與 M組相比，H組MAR、%L.Pm和BFR/BS明顯減小。④成骨細胞和破骨細胞參數(shù)：與C組相比，M組和H組Ob.N/BS和%Ob.S/BS顯著減少，Oc.N/BS和%Oc.S/BS顯著增加；與L組比較，M組和H組Ob.N/BS和%Ob.S/B

10、S顯著減少，Oc.N/BS和%Oc.S/BS顯著增加；與M組比較。H組%Ob.S/BS顯著減少。⑤生長板參數(shù)：G.P.Wi，與C組相比，M組和H組明顯減??；與L組相比，M組和H組明顯減小。與M組比較。H組G.P.Wi明顯減小。D.C.H，與C組和L組相比，M和H組明顯；與M組相比，H組D.C.H明顯減小。⑥三點彎曲試驗參數(shù)：與C組相比，M組最大載荷、彈性載荷和股骨長度明顯降低；H組最大載荷、最大應力和斷裂吸收量明顯降低；彈性載荷和股骨長

11、度明顯減??；與 L組相比，M組斷裂吸收量和股骨長度明顯減??；H組彈性載荷、斷裂吸收量和股骨長度明顯減小。⑦壓縮試驗參數(shù)：與C組相比，L最大載荷、斷裂吸收量、最大應力和骨材料韌性明顯減小；M組斷裂吸收量、最大應力和骨材料韌性明顯減小，最大載荷明顯降低；H組斷裂吸收量、最大應力和骨材料韌性明顯減小，最大載荷明顯降低。與 L組相比，H組最大載荷明顯減小。與M組相比，H組最大載荷明顯減小。
　　3. GIOP模型大鼠全骨髓細胞的培養(yǎng)及分化

12、誘導：①脂肪細胞數(shù)：與C相比。L組未見到脂肪細胞；M組和H組明顯增多。與L組相比，M組和H組明顯增多。②破骨細胞數(shù)：與C組相比，L和M組沒有明顯變化，H組明顯增多。與L組相比，M組沒有明顯變化，H組明顯增多。③破骨細胞骨吸收陷窩數(shù)：與C組相比，L和M組沒有明顯變化，H組明顯增多。與L組相比，M組沒有明顯變化，H組明顯增多。④破骨細胞骨吸收陷窩面積：與C組相比，L和M組沒有明顯變化，H組明顯增多。與L組相比，M組沒有明顯變化，H組明顯增多

13、。
　　4.阿魏酸鈉對大鼠 GIOP的治療作用：①靜態(tài)參數(shù)：與 A-C組相比，A-G組Tb.AT、Tb.Th、Tb.N明顯減少，Tb.Sp增大。與A-G組相比，L組Tb.Th明顯增加；M、H組Tb.AT、Tb.Th、Tb.N明顯增加，Tb．Sp明顯減小。②成骨細胞和破骨細胞參數(shù)：與A-C組相比，A-G組Ob.N/BS、Oc.N/BS以及%Ob.S/BS均顯著增加。與A-G組相比：阿魏酸鈉各組均無明顯變化。③動態(tài)參數(shù)：與A-C組相比

14、，A-G組%L.Pm、BFR/BV和 BFR/BS明顯增大。與 A-G組相比，A-M和A-H組 BFR/TV明顯增加。④生長板參數(shù)：與 A-C組相比：A-G組G.P.Wi明顯增大，與A-G組相比，阿魏酸各組G.P.Wi、D.C.H均沒有明顯變化。
　　結(jié)論：
　　1.以Dex高頻給藥90天，封閉群wistar大鼠脛骨上段骨量減少且骨形成抑制；結(jié)構破壞使力學性能下降，表現(xiàn)GIOP的典型改變，但近交系wistar大鼠脛骨上段在成

15、骨細胞和破骨細胞減少、動態(tài)骨形成抑制以及骨結(jié)構破壞使骨力學性能下降的同時，靜態(tài)骨量增加，沒有表現(xiàn)GIOP典型的低骨量效應。提示：兩品系大鼠wistar大鼠脛骨骨組織對糖皮質(zhì)激素的藥物效應不同，是否與大鼠基因易感性差異有關尚有待探討。
　　2.糖皮質(zhì)激素在體內(nèi)可以促進骨髓間充質(zhì)干細胞向脂肪細胞分化，從而抑制了向成骨細胞的分化，同時，促進骨髓中單核細胞向破骨細胞分化并增強破骨細胞骨吸收功能，在GIOP的形成機制中起關鍵作用。