鳶烏賊蛋白酶解物抗氧化特性的研究.pdf

1、上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文鳶烏賊蛋白酶解物抗氧化特性的研究摘要鳶烏賊（sthenoeuthisoualaniensis）隸屬鞘亞綱，柔魚科，鶯烏賊屬，其廣泛分布于印度洋、太平洋的赤道和亞熱帶海域中，在中國南海中南部蘊(yùn)藏著大量的鳶烏賊資源。鳶烏賊蛋白質(zhì)含量豐富，但由于肉質(zhì)較硬而不受大眾喜歡。近年來，捕獲的鳶烏賊主要被用來制作成魷魚絲外銷。本文以鳶烏賊為原料，采用酶解法獲得其蛋白酶解物，利用響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化酶解鳶烏賊蛋白制備抗氧化肽的最佳工藝，

2、并采用超濾法、凝膠色譜法、反向高效液相色譜法（RPHPLC）和電噴霧電離質(zhì)譜法等手段對酶解產(chǎn)物進(jìn)行分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定。同時(shí)探討了溫度、光照、pH、食品輔料（蔗糖、海藻糖、NaCl、檸檬酸）、防腐劑（山梨酸鉀和苯甲酸鈉）、金屬離子（Cu2、Zn2、Mg2、Ca2和K）、人工模擬胃腸道消化等對鳶烏賊酶解產(chǎn)物的抗氧化穩(wěn)定性以及其功能特性包括乳化性和乳化穩(wěn)定性、起泡性和泡沫穩(wěn)定性、吸水性、持水性和吸油性等，為鳶烏賊蛋白的高值利用和開發(fā)鳶烏賊抗氧

3、化肽功能型產(chǎn)品提供一些理論依據(jù)。主要結(jié)果如下：1.利用響應(yīng)面分析法對酶法水解鳶烏賊蛋白制備抗氧化肽的工藝條件進(jìn)行優(yōu)化。首先通過單因素實(shí)驗(yàn)最終確定木瓜蛋白酶為水解鳶烏賊蛋白制備抗氧化肽的最佳用酶，然后在單因素的基礎(chǔ)上以加酶量、液料比、酶解時(shí)間為自變量，DPPH自由基清除率為響應(yīng)值，建立二次回歸設(shè)計(jì)模型，經(jīng)修正后得到最佳酶解條件為：加酶量為0.66%（WW），液料比為10.2（VW)，酶解時(shí)間為380min，在此條件下DPPH自由基清除率為

4、89.80%，與模型預(yù)測值相吻合。另外，氨基酸分析表明與鳶烏賊蛋白相比，優(yōu)化后的酶解產(chǎn)物中必需氨基酸含量提高了2.2倍，抗氧化性氨基酸蛋氨酸、色氨酸等分別提高了7.2、25.6倍。2.采用分子量為5kDa的超濾膜進(jìn)行超濾，比較了酶解液（PFSPH）、分子量大于5kDa（PFSPHI）和分子量小于5kDa（PFSPHII）的組分的抗氧化活性，結(jié)果表明：分子量小于5kDa（PFSPHII）的組分抗氧化活性最強(qiáng)。采用凝膠色譜SephadexG

5、25對組分PFSPHII進(jìn)行分離，得到四個(gè)不同的組分（A、B、C、D），分別測定四個(gè)組分的DPPH自由基清除能力的半抑制濃度和還原力大小，結(jié)果表明：組分C的上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文StudyonAntioxidantPropertyofEnzymaticHydrolysatesfromPurplebackFlyingSquidABSTRACTPurplebackflyingsquidbelongtocoleoideaommastreph

6、idaesymtectoteuthiswidelydistributedintheequatofIndianOceanPacificsubtropicalwaters.SouthcentralofsouthChinaseacontainsalargenumberofPurplebackflyingsquid.Purplebackflyingsquidisakindoffoodmaterialwhoseproteincontentishi

7、gh.Butpubliccannotacceptitbecauseofthehardmeat.Inrecentyearsthecapturedpurplebackflyingsquidwasmainlymadeintoshreddedsquidfexpt.Inthestudyantioxidantpeptideswerepreparedfrompurplebackflyingsquidproteinthroughcontrolleden

8、zymatictechnology.Responsesurfacemethodswereusedtooptimizethehydrolysisconditionsofpurplebackflyingsquidfproductionofantioxidantpeptides.PurplebackflyingsquidwasisolatedpurifiedIdentifiedbyultrafiltrationgelfiltrationchr

9、omatographyreversehighperfmanceliquidchromatography(RPHPLC)electrosprayionization(ESI)massspectrometer.ThestudyinvestigatedtheeffectsoftemperaturepHlightfoodmaterials（sucrosetrehalosecitricacidNaCl）preservatives(potassiu

10、msbatesodiumbenzoate)metalions（Cu2、Zn2Mg2、Ca2、K）gastrointestinaldigestioninvitroontheantioxidantstabilityofthepeptidesfrompurplebackflyingsquidfunctionalproperties(emulsifyingpropertiesemulsionstabilityfoamingpropertiesf

11、oamingstabilitythewaterabsptioncapacitywaterholdingcapacityoilabsptioncapacity)ofenzymatichydrolysates.Thatprovidesometheeticalbasisfthehighvalueofutilizationofpurplebackflyingsquidproteindevelopmentoffunctionalproductof

12、antioxidantpeptides.mainresultsareasfollows:1.Responsesurfacemethodswereusedtooptimizethehydrolysisconditionsofpurplebackflyingsquid(Sthenoeuthisoualaniensis)fproductionofantioxidantpeptides.Papainwasoptimumenzymeedbythe