電針對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦血管再生及血腦屏障變化影響的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 本課題在導(dǎo)師前期研究成果基礎(chǔ)上,采用改良線栓法建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型,以“益氣活血,祛瘀生新”為法則,取“百會”、“水溝”、“足三里”穴,觀察電針對局灶性腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)行為學(xué),腦TTC染色、HE染色,腦組織中HIF-1α表達,MVD(CD34+細胞)計數(shù),血清白蛋白(Alb)水平及血腦屏障通透性指標——S100β蛋白血清含量的影響,從而探討電針對大鼠局灶性腦缺血再灌注后血管再生的調(diào)節(jié)機制,并試圖初步探

2、索電針治療促血管新生與血腦屏障保護之間的相互關(guān)系。
　　 方法:
　　 將84只180g～220g清潔級雄性sD大鼠按照數(shù)字表隨機分為4組,分別為正常對照組12只(不予處理,正常飼養(yǎng));假手術(shù)組12只(僅分離CCA及IPA至PPA,不插線栓);模型組30只(改良線栓法制備局灶性腦缺血再灌注模型,按照缺血/再灌注24h、48h、72h又分為3個亞組,每亞組10只);電針組30只(改良線栓法制備局灶性腦缺血再灌注模型,按照缺

3、血/再灌注24h、48h、72h又分為3個亞組,每亞組10只,加電針治療)。電針組使用HANS-200A型韓式穴位神經(jīng)刺激儀,采用疏密波(頻率2Hz/15Hz),電流強度約1 mA,以引起局部肌肉稍稍顫動為度,刺激“百會”、“水溝”、“足三里”穴,每次持續(xù)刺激30 min,缺血再灌注2h后行第1次電針刺激,每隔12h再電針刺激1次。分別采用Zea-longa評分法觀察實驗大鼠神經(jīng)行為學(xué)變化;取腦組織,制片,HE染色,普通光鏡下觀察腦大體

4、結(jié)構(gòu)變化;TTC染色計算腦梗死體積比例;免疫組化SP法檢測HIF-1α表達,MVD(CD34+細胞)計數(shù)(Weidner法);取血清標本,澳甲酚氯(BCG)法測定白蛋白濃度水平,ELISA法測定S-100β蛋白含量;干濕重法計量腦含水量(％)。
　　 結(jié)果:
　　 (1)腦組織HE染色光鏡觀察:正常對照組、假手術(shù)組無異常。模型組、電針組大鼠腦組織HE染色顯示缺血后神經(jīng)元損傷病理改變隨再灌注時間的延長由輕至重。電針組大鼠腦

5、組織缺血壞死區(qū)結(jié)構(gòu)較正常對照組、假手術(shù)組疏松,但間質(zhì)水腫不明顯,壞死細胞數(shù)量較模型組有所減少,排列較模型組規(guī)則。
　　 (2)Zea-longa評分:正常對照組、假手術(shù)組大鼠均未出現(xiàn)神經(jīng)功能缺失癥狀。在我們設(shè)定的觀察時間窗內(nèi)(缺血/再灌注24h～72h),模型組大鼠神經(jīng)功能評分在缺血/再灌注24h最高,處于峰值,隨后逐漸下降,至缺血/再灌注72h神經(jīng)功能評分仍然較高,與正常對照組、假手術(shù)組大鼠比較,P＜0.01,有非常顯著差異性

6、。電針組大鼠神經(jīng)功能評分在缺血/再灌注24h也是最高,該峰值與模型組峰值比較,P＜0.05,有顯著差異。電針組大鼠與模型組相比較,缺血/再灌注24h時間點它們的神經(jīng)功能評分之間出現(xiàn)顯著差異,P＜0.05;缺血/再灌注48h～72h時間段內(nèi)它們的神經(jīng)功能評分之間出現(xiàn)非常顯著差異,P＜0.01.電針組大鼠在缺血/再灌注72h時間點神經(jīng)功能評分并未能恢復(fù)到正常水平,與正常對照組、假手術(shù)組大鼠比較還是有非常顯著差異,P＜0.01。
　　

7、 (3)HIF-1α的表達:正常對照組、假手術(shù)組大鼠腦內(nèi)出現(xiàn)微量HIF-1α的表達,兩者之間無統(tǒng)計差異性,P＞0.05。模型組大鼠腦內(nèi)HIF-1α的表達隨缺血/再灌注時間延長不斷增加,在我們設(shè)定的觀察時間窗內(nèi)至缺血/再灌注72h時出現(xiàn)最高點,并在各個時間點均與正常對照組、假手術(shù)組形成非常顯著差異,P＜0.01。而電針組大鼠腦內(nèi)HIF-1α的表達也是隨缺血/再灌注時間廷長不斷增加,且勢頭較模型組強勁,在我們設(shè)定的觀察時間窗內(nèi)至缺血/再灌注

8、72h同樣出現(xiàn)最高點,該峰值與模型組峰值比較出現(xiàn)顯著差異,P＜0.05;同樣在各個時間點電針組大鼠腦內(nèi)HIF-1α的表達也與正常對照組、假手術(shù)組形成非常顯著差異,P＜0.01。
　　 (4)腦梗死體積比:正常對照組、假手術(shù)組大鼠均未出現(xiàn)腦梗死.在我們設(shè)定的觀察時間窗內(nèi)(缺血/再灌注24h～72h),模型組和電針組大鼠腦梗死體積比呈現(xiàn)一個基本正態(tài)分布,都是在缺血/再灌注48h最大,處于峰值。在缺血/再灌注24h時間點,電針組與模型

9、組比較,大鼠腦梗死體積比之間有顯著差異,P＜0.05;在缺血/再灌注48h～72h時間段內(nèi),電針組與模型組比較,大鼠腦梗死體積比之間有非常顯著差異,P＜0.01。與模型組比較,電針組在缺血/再灌注24h時間點大鼠腦梗死體積比減少幅度較小,缺血/再灌注48h～72h時間段大鼠腦梗死體積比減少幅度增大,以缺血/再灌注72h時間點為最大。
　　 (5)缺血腦區(qū)MVD計數(shù):正常對照組、假手術(shù)組大鼠腦內(nèi)MVD極小,幾乎為零,且它們之間無統(tǒng)

10、計差異,P＞0.05。模型組大鼠腦內(nèi)缺血區(qū)MVD隨缺血/再灌注時間延長而增加,但是增長幅度有限,其在各個時間點(缺血/再灌注24h～72h)與正常對照組、假手術(shù)組比較形成非常顯著性差異,P＜0.01.電針組大鼠腦內(nèi)缺血區(qū)MVD也隨缺血/再灌注時間延長而增加,且增長幅度很大,在各個時間點(尤其是缺血/再灌注72h),與模型組比較形成非常顯著性差異,P＜0.01;同時其與正常對照組、假手術(shù)組比較也在各個時間點上形成非常顯著差異,P＜0.01

11、.
　　 (6)血清白蛋白水平:正常對照組大鼠血清白蛋白水平穩(wěn)定;與正常對照組比較,假手術(shù)組大鼠血清白蛋白水平除在缺血/再灌注24h時間點有輕度下降(但無統(tǒng)計學(xué)差異,P＞0.05)外,其余時間段無明顯變化與正常對照組十分接近。模型組和電針組(特別是模型組)大鼠血清白蛋白水平在整個觀察時間窗內(nèi)都呈現(xiàn)明顯下降趨勢,與正常對照組、假手術(shù)組比較,均具有非常顯著差異,P＜0.01.在各個時間點電針組大鼠血清白蛋白水平與模型組比較,均具有顯

12、著差異,P＜0.05。
　　 (7)血清S-100β蛋白濃度:正常對照組、假手術(shù)組大鼠在各個時間點血清S-100β蛋白均未被檢測到。模型組、電針組大鼠在各個時間點血清中都檢測到S-100β蛋白,且與正常對照組、假手術(shù)組比較具有非常顯著性差異,P＜0.01.在我們設(shè)定的觀察時間窗內(nèi)(缺血/再灌注24h、48h、72h),模型組、電針組大鼠血清S-100β水平表達規(guī)律相似,均從缺血/再灌注24h開始升高,缺血/再灌注48h到達峰值,

13、隨后下降,至缺血/再灌注72h仍然維持較高水平,與正常對照組、假手術(shù)組大鼠比較,P＜0.01.電針組大鼠在各個時間點血清S-100β蛋白水平都較模型組低,P＜0.05,表示有顯著差異性。
　　 (8)腦含水量:正常對照組、假手術(shù)組實驗大鼠腦含水量穩(wěn)定,并保持在正常水平。模型組、電針組實驗大鼠腦含水量在缺血再灌注后均明顯上升,在各個時間點與正常對照組、假手術(shù)組比較,差異性顯著,P＜0.05甚至P＜0.01。在我們設(shè)定的觀察時間窗內(nèi)

14、(缺血/再灌注24h、48h、72h),模型組、電針組實驗大鼠腦含水量升高規(guī)律相似,均從缺血/再灌注24h開始升高,至缺血/再灌注48h到達峰值,隨后下降,缺血/再灌注72h腦含水量仍然維持較高水平,未恢復(fù)正常(包括電針組)。電針組大鼠腦含水量在各個時間點都較模型組低,P＜0.05,表示有顯著差異性。
　　 結(jié)論:
　　 大鼠腦缺血/再灌注后,早期電針治療介入能改善神經(jīng)功能缺失癥狀、提高腦耐缺氧能力、減少腦梗死體積、促進