幼齡茶樹(shù)在干旱脅迫下基因表達(dá)差異分析.pdf

1、茶樹(shù)(Camellia sinensis(L.) O.Kuntze)是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物之一，不僅栽培歷史悠久，而且分布廣泛。已有研究表明，我國(guó)西南部是茶樹(shù)的起源中心，孕育了豐富的茶樹(shù)種質(zhì)資源，為優(yōu)良品種的選育奠定了優(yōu)良的基礎(chǔ)。干旱是限制世界作物生產(chǎn)的主要環(huán)境因子之一，全球干旱、半干旱地區(qū)約占土地總面積的36％，占耕地面積的43％。我國(guó)干旱和半干旱地區(qū)面積約占全國(guó)土地面積的1/2，同時(shí)，隨著全球溫室效應(yīng)的增強(qiáng)，對(duì)抗旱品種的選育將是未來(lái)品

2、種的選育的一個(gè)重要方面。
　　 傳統(tǒng)的茶樹(shù)品種選育主要是通過(guò)系統(tǒng)選育和單株選育，但是有遺傳背景復(fù)雜、遺傳不穩(wěn)定、選育時(shí)間較長(zhǎng)、選育盲目性較大等缺陷，同時(shí)抗旱指標(biāo)的選擇多是以環(huán)境性狀為主。分子育種直接在分子水平選育，通過(guò)對(duì)遺傳物質(zhì)DNA的篩選進(jìn)行品種選育，能有效避免上述缺點(diǎn)。DD-PCR(差異顯示PCR技術(shù)，或DDRT-PCR)有操作簡(jiǎn)便、靈敏性良好和效率較高的優(yōu)點(diǎn)，本研究首次將技術(shù)成熟的差異顯示PCR技術(shù)應(yīng)用于茶樹(shù)干旱環(huán)境下的差

3、異表達(dá)基因的篩選。本實(shí)驗(yàn)意圖將在干旱環(huán)境下有表達(dá)變化的基因片段作為以后抗旱品種研究和選育的一個(gè)篩選指標(biāo)，對(duì)干旱品種的選育做出一定的貢獻(xiàn)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)得到了以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 1、幼齡茶苗利用試劑盒提取RNA的最佳部位是嫩葉和幼根，因?yàn)榉e累的次生產(chǎn)物少，對(duì)提取到的RNA污染少，但根部RNA保存較困難，降解較快，說(shuō)明應(yīng)用該試劑盒提取的RNA中有其他雜質(zhì)，影響根部RNA的保存。
　　 2、PCR反應(yīng)時(shí)用Mixmixture的擴(kuò)增

4、效果要好于傳統(tǒng)的Taq酶體系；電泳條件是120mv，電泳1h左右；電泳所用凝膠濃度約為1.5％分離效果較好；取材部位為嫩葉時(shí)，退火溫度為45℃時(shí)，擴(kuò)增條帶的假陽(yáng)性較低，條帶的重復(fù)性較好，取材部位為幼根時(shí)，根據(jù)處理時(shí)間，應(yīng)適當(dāng)降低退火溫度；PCR反應(yīng)參數(shù)以普通PCR反應(yīng)參數(shù)為對(duì)照即可。
　　 3、經(jīng)過(guò)PCR反應(yīng)后，發(fā)現(xiàn)條帶有上調(diào)表達(dá)、下調(diào)表達(dá)、常量表達(dá)三種表達(dá)量的變化；發(fā)現(xiàn)部分條帶對(duì)錨定引物有一定的兼并性；通過(guò)引物篩選，確定了進(jìn)行

5、不同研究所需要的引物組合，以幼根為材料進(jìn)行試驗(yàn)，需要重新確定脅迫劑濃度和脅迫處理時(shí)間。
　　 4、根據(jù)測(cè)序結(jié)果可以看出，茶苗在干旱脅迫處理下，有很多基因條帶表達(dá)產(chǎn)生變化，部分條帶的變化趨勢(shì)和有研究者[94、951報(bào)道的酶活變化趨勢(shì)相近。
　　 5、確定應(yīng)用DDRT-PCR技術(shù)在茶樹(shù)抗旱分子機(jī)制的探討中是可行的，在所選擇的茶樹(shù)品種福鼎大白茶幼苗上取得的較好的實(shí)驗(yàn)效果，可以應(yīng)用該方法對(duì)其它茶樹(shù)品種及不同發(fā)育期茶樹(shù)品種進(jìn)行相關(guān)