TOLL樣受體3在動(dòng)脈粥樣硬化中作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　觀察下肢ASO患者外周血單核細(xì)胞中TLR3與IFN-β的表達(dá)的關(guān)系；觀察AS小鼠模型血漿及動(dòng)脈中TLR3與IFN-β的表達(dá)的關(guān)系，以及AS小鼠模型中Toll樣受體3與樹突狀細(xì)胞的分化成熟的關(guān)系。
　　方法：
　　1、人外周血單核細(xì)胞中TLR3與IFN-β的表達(dá)陽性率的檢測(cè)
　　下肢ASO患者20例，健康組20例。取新鮮外周血EDTA抗凝后使用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞。離心后棄去上清后獲得白細(xì)胞。加入兔抗

2、人 CD14 FITC標(biāo)記抗體，兔抗人CD283(TLR3) PE標(biāo)記抗體，兔抗人IFN-β-APC標(biāo)記抗體，IgG1 PE標(biāo)記抗體后通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血單核細(xì)胞中TLR3及IFN-β的表達(dá)陽性率。
　　2、高脂飲食喂養(yǎng)ApoE(-/-)小鼠建立AS小鼠模型
　　在SPF級(jí)環(huán)境下使用高脂飲食喂養(yǎng)5周齡ApoE(-/-)小鼠10周，共24只（雌鼠12只，雄鼠12只），實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為兩組：實(shí)驗(yàn)組14只（雌鼠7只，雄鼠7只）

3、，對(duì)照組10只（雌鼠5只，雄鼠5只）。
　　3、Poly(I:C)激動(dòng)AS小鼠模型中TLR3
　　實(shí)驗(yàn)組使用 Poly(I:C)腹腔注射，對(duì)照組注射等劑量生理鹽水。隔日注射10周后處死小鼠。取出外周血標(biāo)本EDTA抗凝后離心取上清液液氮中保存待檢測(cè)，取出主動(dòng)脈標(biāo)本后液氮中保存待檢測(cè)。
　　4、檢測(cè)血漿中血脂、血糖水平，血漿及動(dòng)脈中TLR3、IRF3、IFN-β及IL-1β水平
　　生化分析儀檢測(cè)血漿中LDL-C、H

4、DL-C、TG、TC、Glu水平，ELISA法檢測(cè)血漿及動(dòng)脈中TLR3、IRF3、IFN-β及IL-1β水平。
　　5、檢測(cè)AS小鼠模型主動(dòng)脈中成熟樹突狀細(xì)胞數(shù)量和分布
　　免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)、對(duì)照組小鼠主動(dòng)脈組織中MHC-II、CD11c和CD86陽性樹突狀細(xì)胞的數(shù)量和分布。
　　結(jié)果：
　　1、與對(duì)照組相比，下肢ASO患者外周血單核細(xì)胞中TLR3表達(dá)陽性率顯著增加(P<0.001)；
　　2、與對(duì)

5、照組相比，下肢ASO患者外周血單核細(xì)胞中IFN-β表達(dá)陽性率顯著增加(P<0.01)；
　　3、與對(duì)照組ApoE(-/-)小鼠相比，實(shí)驗(yàn)組LDL-C、HDL-C、TG、TC水平無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；與對(duì)照組ApoE(-/-)小鼠相比，實(shí)驗(yàn)組Glu水平顯著降低(P<0.001)；
　　4、與對(duì)照組ApoE(-/-)小鼠相比，實(shí)驗(yàn)組血漿及動(dòng)脈中TLR3、 IRF3、IFN-β水平顯著增加(均P<0.001)；

6、　　5、與對(duì)照組 ApoE(-/-)小鼠相比，實(shí)驗(yàn)組血漿及動(dòng)脈中 IL-1β水平顯著減少(P<0.001)；
　　6、在Poly(I:C)腹腔注射組和生理鹽水腹腔注射組小鼠動(dòng)脈內(nèi)均有成熟DCs的聚集,并且成熟DCs主要分布在內(nèi)膜斑塊和動(dòng)脈外膜周邊區(qū)域。但是與對(duì)照組相比，Poly(I:C)腹腔注射組小鼠動(dòng)脈內(nèi)的CD86、CD11c和MHC-II陽性DCs明顯增加。
　　結(jié)論：
　　1、下肢ASO病變能夠?qū)е峦庵苎獑魏思?xì)胞

7、中TLR3分泌增加；
　　2、下肢ASO病變能夠?qū)е峦庵苎獑魏思?xì)胞中IFN-β分泌增加；
　　3、Poly(I:C)能夠?qū)е翧S病變小鼠模型血清中Glu水平顯著降低，而對(duì)血清中LDL-C、HDL-C、TG、TC水平無明顯影響；
　　4、Poly(I:C)能夠?qū)е?AS病變小鼠模型血漿及動(dòng)脈標(biāo)本中 TLR3、IRF3及IFN-β水平顯著增加；并導(dǎo)致血漿及動(dòng)脈標(biāo)本中IL-1β水平顯著減少；
　　5、Poly(I:C)