肝纖維化單個核細胞蛋白質(zhì)組初步研究.pdf

1、目的:
　　 世界衛(wèi)生組織報道全球約20億人感染過HBV,慢性患者可能發(fā)展為肝纖維化、肝硬化或肝細胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC);我國慢性乙肝導致的肝纖維化較為多見。
　　 及時準確判斷肝纖維化發(fā)展程度,可為病情診斷和臨床治療提供重要幫助。目前,肝臟穿刺活檢病理檢查仍是診斷慢性肝病肝纖維化、肝硬化的金標準,但由于其具有創(chuàng)傷性,患者易產(chǎn)生不適感及發(fā)生潛在并發(fā)癥,更安全便捷的檢測方法有待進

2、一步研究。
　　 隨著蛋白質(zhì)組學技術的發(fā)展,該學科在發(fā)現(xiàn)疾病特異生物標志物的應用中顯現(xiàn)出獨特的優(yōu)勢;而PBMC是機體重要的免疫細胞,與很多疾病的發(fā)生發(fā)展過程相關。因此,我們設計通過蛋白質(zhì)組學路線來研究肝纖維化不同分期患者PBMC蛋白質(zhì)表達差異,來發(fā)現(xiàn)PBMC中肝纖維化發(fā)展可能的生物標志物,為肝纖維化的診斷、治療及預后探索新的研究方向。
　　 方法:
　　 收集2009年3月至2011年2月由復旦附屬上海市公共衛(wèi)生

3、臨床中心肝炎科就診的慢性乙型肝炎肝纖維化病人,按肝活檢診斷分為S1期、S4期各24例,共48例,患者年齡34-63歲,平均46.5±8.15歲,各組之間年齡(P=0.780)無統(tǒng)計學差異;
　　 用淋巴細胞分離液來分離PBMC,提取全細胞蛋白質(zhì),采用Bradford法進行蛋白質(zhì)濃度測定;
　　 蛋白質(zhì)的二維凝膠電泳對蛋白質(zhì)進行分離;通過ImageMaster2D Platinurn6.0軟件對所得膠塊圖像進行分析。

4、>　　 所得差異蛋白質(zhì)點經(jīng)酶解后,通過納升級反向液相色譜串聯(lián)電噴霧離子阱質(zhì)譜進行鑒定。對比數(shù)據(jù)庫,明確鑒定所得蛋白質(zhì)的信息,查閱文獻了解差異蛋白質(zhì)的生物學意義。
　　 結果:
　　 蛋白質(zhì)點得到較好分離,S1組和S4組雙向電泳圖中分別檢測到1057±134,1052±130個蛋白質(zhì)點。S1組和S4組的平均匹配點數(shù)和匹配率分別為727±161(61.5％)和716±139(58.1%)。
　　 獲得12個差異表達

5、的蛋白質(zhì)點,在肝纖維化S4期中,8個蛋白質(zhì)點上調(diào),4個蛋白質(zhì)點下調(diào);12個差異表達的蛋白質(zhì)點均得到準確鑒定,這些差異蛋白質(zhì)包括與細胞運動、與細胞粘附以及細胞轉(zhuǎn)錄等相關的蛋白質(zhì)。
　　 查閱文獻,發(fā)現(xiàn)PBMC中差異蛋白質(zhì)膜組織伸展刺突蛋白(Moesin)、膠轉(zhuǎn)蛋白(Transgelin-2)、熱休克蛋白(HSP70)等蛋白質(zhì)可能與肝纖維化分期相關,可以作為肝纖維化發(fā)生機制的一個探索方向。
　　 結論:
　　 我們采