乙肝纖維化分期相關(guān)血漿標(biāo)志物的定量蛋白質(zhì)組研究.pdf

1、肝纖維化發(fā)生的病因很多，我國(guó)多由HBV病毒感染導(dǎo)致，而在歐美等國(guó)則以酒精所致者多見(jiàn)。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，全球約20億人曾感染過(guò)HBV，其中3.5億人為慢性HBV感染者，每年大約有100萬(wàn)人死于HBV感染導(dǎo)致的肝衰竭、肝硬化以及肝癌。我國(guó)是病毒性肝炎高發(fā)區(qū)，僅乙型肝炎病毒(HBV)攜帶者就達(dá)1.2億，其中慢性乙型肝炎患者有3,000萬(wàn)以上，約25％慢性乙肝患者最終將發(fā)展為肝硬化(Liver/hopatic cirrhosis，LC)，甚至

2、肝癌(1)。假如肝纖維化病人得不到及時(shí)有效地治療，就有可能逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)楦斡不?，甚至進(jìn)一步發(fā)展為肝癌，每年肝硬化患者中肝癌的發(fā)生率大約為3％~1096。肝纖維化既是一種代償修復(fù)反應(yīng)，又是肝損傷的促進(jìn)因素，表現(xiàn)為肝內(nèi)結(jié)締組織過(guò)度增生與沉積。肝纖維化是一個(gè)慢性漸進(jìn)的過(guò)程，準(zhǔn)確診斷肝纖維化進(jìn)程，可為病情診斷和臨床治療提供幫助。目前，肝穿刺活檢病理檢查是診斷慢性肝病肝纖維化、肝硬化的金標(biāo)準(zhǔn)，但其具有創(chuàng)傷性，患者易產(chǎn)生不適感及潛在并發(fā)癥；病人不愿意接

3、受多次肝穿跟蹤監(jiān)控病情及療效等，所以常規(guī)肝穿刺活檢在實(shí)際操作中具有相當(dāng)難度。理想的診斷指標(biāo)應(yīng)具有高度敏感度和特異度，且簡(jiǎn)便易行，患者易于接受，故尋求無(wú)創(chuàng)性診斷肝纖維化的有效方法目前是臨床醫(yī)生關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題之一。 由于人體血漿(血清)包含了幾乎涉及人體所有器官或者組織相關(guān)的豐富信息，并能反映幾乎所有疾病狀態(tài)信息，再加上它具有取材方便快捷低創(chuàng)等特點(diǎn)，是最為理想的臨床治療和診斷的樣本材料。截至目前，在血漿中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了與肝纖維化以及硬化

4、相關(guān)的一些蛋白標(biāo)志物，但由于它們?cè)陟`敏性和特異性等方面，還不能滿(mǎn)足臨床的需要，仍需借助肝穿進(jìn)行病理檢查。因此，還需要進(jìn)一步發(fā)掘具有臨床診斷或者治療意義的血漿蛋白標(biāo)志物。近年來(lái)，隨著定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展，整體系統(tǒng)地從蛋白質(zhì)組水平分析血漿中與疾病及生理相關(guān)的蛋白標(biāo)志物成為現(xiàn)實(shí)。 本實(shí)驗(yàn)以目前的肝纖維化分期檢測(cè)“黃金標(biāo)準(zhǔn)”一肝穿病理檢測(cè)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，利用定量蛋白質(zhì)組技術(shù)手段，從血漿中挖掘與病理檢測(cè)結(jié)果相一致的蛋白(群)，以期發(fā)現(xiàn)與肝

5、纖維化分期相關(guān)的新蛋白(蛋白組合)，提高肝纖維化分期檢測(cè)的精確性和靈敏度，服務(wù)于纖維化發(fā)生機(jī)制研究和臨床實(shí)踐。 乙?；繕?biāo)記技術(shù)是針對(duì)肽段N末端進(jìn)行氘(氫)標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組技術(shù)手段，具有標(biāo)記完全、定量準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)單、價(jià)格便宜等特點(diǎn)。本研究利用此技術(shù)，針對(duì)基于病理檢查的乙肝纖維化一期(S1)、二期(S2)、三期(S3)、四期(S4)以及健康對(duì)照(S0)五組血漿樣本(各組包含10例左右樣本)進(jìn)行差異對(duì)比分析，最終共得到了有定量信

6、息的血漿蛋白1，063個(gè)，其中在肝臟纖維化不同時(shí)期具有顯著差異(Ratio>1.5，P<0.05)的血漿蛋白246個(gè)，形成了與肝纖維化分級(jí)相關(guān)的候選蛋白(群)。針對(duì)差異蛋白定量Ratio值(組內(nèi)蛋白與內(nèi)標(biāo)比值)進(jìn)行聚類(lèi)分析的結(jié)果顯示，總體差異蛋白(群)被聚為五大類(lèi)別，在五組樣本(S0-S4)間分別呈現(xiàn)逐漸上升、逐漸下降、先上升后下降、先下降后上升以及上升下降波動(dòng)等趨勢(shì)。五組間的聚類(lèi)結(jié)果顯示，無(wú)纖維化以及纖維化前期(S0，S1，S2)被聚

7、為一類(lèi)，纖維化后期(S3，S4)被聚為一類(lèi)，提示差異蛋白R(shí)atio值在纖維化前后和后期呈現(xiàn)明顯區(qū)別。其聚類(lèi)分布特點(diǎn)與纖維化發(fā)展進(jìn)程與實(shí)際病理特點(diǎn)相吻合。利用基于文獻(xiàn)數(shù)據(jù)支持的Ingenituy通路分析軟件對(duì)246個(gè)差異蛋白進(jìn)行分析，結(jié)果表明，這些鑒定的差異蛋白大部分被定位在了八個(gè)主要的信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)(血管系統(tǒng)發(fā)育網(wǎng)絡(luò)圖/脂類(lèi)代謝網(wǎng)絡(luò)圖/細(xì)胞生長(zhǎng)分化通路網(wǎng)絡(luò)/免疫及淋巴系統(tǒng)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)/細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)與組織發(fā)育網(wǎng)絡(luò)/氨基酸代謝與蛋白修飾網(wǎng)絡(luò)/轉(zhuǎn)錄