鮰魚皮明膠ACE抑制肽的制備、分離、純化及特性研究.pdf

1、本論文以鮰魚皮明膠為原料制備ACE抑制肽。首先，以ACE抑制率為指標(biāo),研究酶解鮰魚皮明膠制備ACE抑制肽的工藝條件；然后，通過系統(tǒng)的分離純化，得到1條具有ACE抑制活性的九肽和一條十八肽；最后，對這兩條肽的基本的理化特性進(jìn)行測定。
　　(1)鮰魚皮經(jīng)過脫脂及酸堿處理后用熱水抽提，得到鮰魚皮明膠。以ACE抑制率為指標(biāo)，分別采用胃蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶對鮰魚皮明膠進(jìn)行水解，確定了堿性蛋白酶和胃蛋白酶作為水

2、解明膠用酶。通過響應(yīng)面優(yōu)化分析，確定了堿性蛋白酶單獨(dú)水解鮰魚皮明膠制備ACE抑制肽的最佳酶解工藝條件為底物濃度5%，加酶量2.2%，pH8.0，溫度50℃，酶解時(shí)間3h。水解液在堿性蛋白酶最佳酶解條件下水解3h之后，再經(jīng)胃蛋白酶最適水解條件水解3h，所得明膠水解物的ACE抑制率最高，達(dá)到97.83%。
　　(2)分別采用超濾、DEAE離子交換層析、葡聚糖G-15、半制備型RP-HPLC等對酶解液進(jìn)行分離純化，采用質(zhì)譜儀器ultra

3、flexTOF/TOF進(jìn)行氨基酸序列的測定。首先使用截留分子量分別為3000Da和1000Da的超濾膜分離純化酶解液。酶解液經(jīng)超濾后被分成三個組分，Da<1000組分和1000

4、進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化，得到兩個峰，分別為F31和F32，其中F32的ACE抑制率較高，為89.65%。F32經(jīng)半制備型RP-HPLC分離后，得到五個峰，分別為R1、R2、R3、R4和R5，其中R5的ACE抑制率最高，為90.00%。采用質(zhì)譜儀器ultraflexTOF/TOF測定R5的氨基酸序列。結(jié)果表明，樣品中主要含有兩種具有較高ACE抑制率的多肽，分別為肽1(氨基酸序列：FTHNGYLNA，分子量817.37，IC50為0.3041

5、mg/mL)和肽2(氨基酸序列：SNTRVSAHKHCGSYLIIN,分子量1797.95，IC50為0.8064mg/mL)。
　　(3)對鮰魚皮明膠ACE抑制肽的體外穩(wěn)定性進(jìn)行初步研究，分別考察了溫度、pH及常見金屬離子等對ACE抑制肽穩(wěn)定性的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：ACE抑制肽具有較強(qiáng)的耐熱性，加熱到100℃時(shí)，其ACE抑制率仍能穩(wěn)定在90%左右；ACE抑制肽1在堿性條件下較穩(wěn)定，ACE抑制肽2在酸性條件下較穩(wěn)定；常見金屬離子如