糖尿病大鼠腎組織CTGF的表達(dá)變化及苦參堿對其干預(yù)的研究.pdf

1、目的： 糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病最常見、最嚴(yán)重的慢性并發(fā)癥之一，它己成為我國終末期腎衰竭(ESRD)的第二位原因，患者最終只能依靠透析或腎移植來維持生命，給家庭和社會帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神壓力，因而探索糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制及其防治方法是當(dāng)今腎病學(xué)者熱切關(guān)注的課題。 國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制主要是以高血糖為原始啟動因素，影響多種細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，繼而激’活各種血

2、管活性物質(zhì)、生長因子、細(xì)胞介質(zhì)等，影響腎小球血流動力學(xué)改變,最終發(fā)展為腎小球硬化。但現(xiàn)在逐步認(rèn)識到糖尿病腎病腎間質(zhì)病變的重要性，與預(yù)后關(guān)系密切。TGF-β<,1>、CTGF目前己被公認(rèn)為是包括糖尿病腎小球硬化在內(nèi)的多種纖維化病變發(fā)病機(jī)制中的驅(qū)動因子，是抗纖維化治療的有效靶位點。 研究證實，轉(zhuǎn)化生長因子-β<,1>(transformin growthfactorβ<,1>,TGF-β<,1>)可調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)(ex

3、tracellular matrix,ECM)的合成和沉積，減少ECM的降解，其過度表達(dá)可引起腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化，說明TGF-β<,1>與腎臟疾病的進(jìn)展密切相關(guān)。 結(jié)締組織生長因子(Connective tissue growth factor,CTGF)是TGF-β<,1>的下游效應(yīng)介質(zhì)，研究發(fā)現(xiàn)CTGF不介導(dǎo)TGF-B<,1>的抗增殖和抗炎作用，僅介導(dǎo)TGF-β<,1>的促細(xì)胞基質(zhì)合成作用，可通過自分泌與旁分泌的形式

4、，刺激腎小球系膜細(xì)胞及其他腎臟固有細(xì)胞增殖及ECM堆積，參與腎小球肥大及腎小球硬化，導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生發(fā)展。本研究采用STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠模型，檢測糖尿病大鼠病理狀態(tài)下生化指標(biāo)的變化，觀察糖尿病大鼠腎組織TGF-β<,1>、FN、α-SMA、Ⅳ型膠原及CTGF的表達(dá)及其與腎臟組織病變發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系；同時應(yīng)用藥物苦參堿對糖尿病腎病大鼠模型進(jìn)行干預(yù)，探討苦參堿降低尿蛋白、保護(hù)腎功能的作用機(jī)理，為臨床防治糖尿病腎病提供實驗性理論依

5、據(jù)。 方法： 選擇健康雄性Wistar大鼠48只(體重180g±20g)，常規(guī)飼養(yǎng)1周后，分別采用尾靜脈取血方法測定血糖，試紙法檢測尿糖均正常。繼而全部禁食、水12小時后隨機(jī)抽取32只腹腔注射鏈脲佐菌素(55mg/kg，溶于0.1mol/L檸檬酸緩沖液，濃度為2％，pH值為4.5)建立糖尿病大鼠模型，72小時后尾靜脈采血測定血糖，試紙法檢測尿糖，血糖≥16.7mmol/L，尿糖+++～++++確定為糖尿病大鼠模型。其余

6、16只為正常對照組(A組)，注射同等體積的檸檬酸緩沖液。后將糖尿病模型大鼠隨機(jī)分為：糖尿病對照組(B組)、苦參堿干預(yù)組(C組)各16只；C組給予苦參堿，用量為50mg·kg<'-1>·d<'-1>，連續(xù)灌胃給藥，每日1次。A組與B組給予等量蒸餾水灌胃。實驗期間大鼠自由進(jìn)食(標(biāo)準(zhǔn)飼料)、飲水，不使用胰島素及其它降糖藥物。分別于干預(yù)第4、8周末，各實驗組任取8只大鼠，代謝籠收集24小時尿，后稱體重，斷頭取血，測量腎重，留取血、尿、腎組織標(biāo)本

7、待測24小時尿蛋白定量、血糖、血肌酐、尿肌酐、肌酐清除率及尿素氮；計算腎臟肥大指數(shù)；光鏡下觀察各組大鼠腎小球、腎小管組織形態(tài)學(xué)變化；采用免疫組織化學(xué)法(SP法)檢測各組大鼠腎組織TGF-β<,1>、FN、α-SMA、Ⅳ型膠原及CTGF的表達(dá)；并檢測各組大鼠尿液TGF-β<,1>mRNA的含量。 結(jié)果： 1.血、尿生化指標(biāo)：在實驗4周及8周時，B組大鼠24小時尿蛋白定量、腎臟肥大指數(shù)、血糖、肌酐清除率及尿素氮均較A組有顯著

8、升高(P<0.01)；C組大鼠血糖與B組相比無明顯差異(P>0.05)；而24小時尿蛋白定量、腎臟肥大指數(shù)、肌酐清除率及尿素氮較B組均明顯下降(P<0.01，P<0.05)。 2.腎組織病理學(xué)：光鏡下，正常對照組大鼠在4、8周時，腎小球和腎小管間質(zhì)均未見明顯的病理改變。B組大鼠腎組織內(nèi)嗜PAS物質(zhì)較同期A組明顯增多，且隨時間延長其變化更加顯著。與B組相比，C組大鼠其腎組織病理變化明顯減輕。 3.腎組織TGF-β<,1>、

9、FN、α-SMA、Ⅳ型膠原及CTGF表達(dá)情況：免疫組織化學(xué)檢查顯示實驗4周、8周時，正常對照組大鼠腎組織中TGF-β<,1>、FN、α-SMA、Ⅳ型膠原及CTGF均僅有微弱的表達(dá)。與A組相比，B組大鼠于實驗4周及8周時，其TGF-β<,1>、FN、α-SMA、Ⅳ型膠原及CTGF的表達(dá)均明顯升高(P<0.01)；與B組相比，C組大鼠的表達(dá)明顯降低(P<0.01，P<0.05)。 4.ELISA：與A組相比，B組大鼠于實驗4周及8周

10、時，尿液中TGF-β<,1>mRNA的含量明顯增高(P<0.01)；與B組相比，C組大鼠尿液中TGF-β<,1>mRNA的含量明顯降低，有顯著性差異(P<0.01)。 結(jié)論： 1.糖尿病狀態(tài)下，大鼠腎組織中TGF-β<,1>、FN、α-SMA、Ⅳ型膠原及CTGF的表達(dá)均有增高。 2.苦參堿可能通過降低糖尿病大鼠腎組織TGF-β<,1>、FN、α-SMA、Ⅳ型膠原及CTGF的表達(dá)，降低糖尿病大鼠尿液中TGF-β<,