神經(jīng)干細(xì)胞向膠質(zhì)瘤干細(xì)胞遷移及對(duì)其生長特性的影響.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文神經(jīng)干細(xì)胞向膠質(zhì)瘤干細(xì)胞遷移及對(duì)其生長特性的影響姓名：張所軍申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：神經(jīng)外科指導(dǎo)教師：雷霆201105華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文第二部分第二部分分化培養(yǎng)降低膠質(zhì)瘤干細(xì)胞表型分化培養(yǎng)降低膠質(zhì)瘤干細(xì)胞表型目的：目的：研究ATRA分化治療對(duì)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞表型的影響。方法：方法：首先從神經(jīng)球培養(yǎng)法人腦膠質(zhì)瘤手術(shù)標(biāo)本中富集培養(yǎng)原代膠質(zhì)瘤干細(xì)胞；以全反式維甲酸ATRA(1uM)對(duì)膠質(zhì)瘤干細(xì)

2、胞分化培養(yǎng)一周；然后流式細(xì)胞術(shù)對(duì)比檢測膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與其分化細(xì)胞CD133陽性比例差異；免疫印跡法（WesternBlotting）對(duì)比分析膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與其分化細(xì)胞干細(xì)胞標(biāo)志物CD133和Nestin以及分化標(biāo)志物GFAP表達(dá)水平差異；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RTPCR）檢測Notch1在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞和其分化細(xì)胞表達(dá)差異；最后將膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與其分化細(xì)胞分別原位種植鼠腦（Bulbcnudemice），觀察ATRA分化對(duì)裸鼠生存時(shí)間的影響。結(jié)果

3、：結(jié)果：神經(jīng)球培養(yǎng)法有效從膠質(zhì)瘤手術(shù)標(biāo)本中富集培養(yǎng)呈懸浮球樣生長的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞球（NCH421K、NCH441和NCH644）而ATRA誘導(dǎo)分化一周后的分化細(xì)胞（NCH421Kdiff、NCH441diff和NCH644diff）呈多突起伸展樣貼壁生長；流式細(xì)胞術(shù)檢測示原代膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中CD133陽性細(xì)胞比例較高（11.02%33.55%），而ATRA分化處理后CD133陽性細(xì)胞比例明顯降低，P0.05；WesternBloting檢測

4、示膠質(zhì)瘤干細(xì)胞在蛋白水平高表達(dá)CD133和Nestin，而ATRA誘導(dǎo)的分化細(xì)胞干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)降低，分化標(biāo)志物GFAP表達(dá)增加，P0.05；RTPCR檢測示Notch1經(jīng)ATRA分化后表達(dá)明顯降低，P0.05；膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與其分化細(xì)胞經(jīng)原位裸鼠腦內(nèi)種植試驗(yàn)，提示ATAR分化后裸鼠生存時(shí)間明顯延長，P0.05。結(jié)論：結(jié)論：ATRA可有效分化膠質(zhì)瘤干細(xì)胞，降低干細(xì)胞標(biāo)志物CD133和Nestin的表達(dá)；同時(shí)ATRA誘導(dǎo)分化后，Notch信