抗番茄灰霉病生物有機(jī)肥菌種的篩選及應(yīng)用研究.pdf

1、番茄灰霉病是常見的對番茄危害較重的一種病害?；瘜W(xué)防治番茄灰霉病易產(chǎn)生抗藥性、農(nóng)藥殘留及生態(tài)失衡等負(fù)作用。生物防治具有高效、零污染、不產(chǎn)生抗藥性和預(yù)防和治理結(jié)合等優(yōu)勢，其中生物有機(jī)肥既可以增產(chǎn)，改善產(chǎn)品品質(zhì)，又可以調(diào)節(jié)和改善土壤微生物的組成，進(jìn)而在一定程度上減輕農(nóng)作物病害的危害。篩選有效的番茄灰霉病拮抗菌，進(jìn)而制備拮抗菌劑和生物有機(jī)肥均是利用生物技術(shù)防治番茄灰霉病的重要途徑。因此，本試驗通過對相關(guān)土壤微生物的分離純化，篩選并鑒定對番茄灰霉

2、病病原菌具有較好抑制作用的拮抗菌，并通過單因素和正交試驗優(yōu)化其固體發(fā)酵培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件，研究拮抗菌菌劑的保存方式，還將拮抗菌與腐熟后的有機(jī)肥發(fā)酵制成生物有機(jī)肥，進(jìn)而通過室內(nèi)盆栽試驗來研究其對番茄灰霉病的防治效果。
　　1.土壤中番茄灰霉病拮抗菌的分離、篩選及鑒定。為了獲得對番茄灰霉病有抑制效果的拮抗菌并確定菌株的分類地位，以土壤為分離源，采用稀釋涂平板及平板劃線方法分離，平板對峙方法篩選，對所篩的菌株進(jìn)行菌株形態(tài)鑒定和ITS區(qū)序列

3、解析鑒定。結(jié)果表明，從土樣中共分離出47株真菌，初篩得到27株真菌對番茄灰霉病原菌有拮抗作用，復(fù)篩得到一株對番茄灰霉病病原菌抑制率高達(dá)74.80％的菌株Z47，鑒定為草酸青霉（Penicillium oxalicum）。
　　2.拮抗菌Z47固體發(fā)酵條件的優(yōu)化及其菌劑保存方式的研究。為研究拮抗菌Z47固體發(fā)酵條件和菌劑保存方式，通過單因素和正交試驗探索了其固體培養(yǎng)基、外加碳源、外加氮源、外加磷源、料水比、固料瓶裝量、接種量、光照、

4、發(fā)酵溫度及時間對該菌產(chǎn)孢量的影響;并以濕樣和烘干樣在低溫和室溫條件下保存拮抗菌Z47菌劑，定期測定孢子數(shù)和有效活菌數(shù)。拮抗菌Z47的固體發(fā)酵優(yōu)化條件為:固料瓶裝量15 g/250mL三角瓶，稻殼粉與麩皮4∶1混合，外加麥芽糖、硫酸銨和磷酸氫二鉀的量分別為1.5％、2％和0.15％，料水比為1∶0.6(g·mL-1)，接種量為12.5％(mL·g-1)，全黑暗培養(yǎng)，25℃～20℃～28℃下依次發(fā)酵2d，持續(xù)發(fā)酵12d，可獲得高達(dá)5×109

5、 CFU/g的產(chǎn)孢量。濕樣5℃存放的拮抗菌Z47孢子存活率一直最高，但從拮抗菌Z47有效活菌數(shù)上看，40℃烘干樣室溫存放顯著高于濕樣5℃存放、濕樣室溫存放和40℃烘干樣5℃存放，因此，拮抗菌Z47菌劑最佳的保存方式為40℃烘干后室溫存放。
　　3.拮抗菌Z47生物有機(jī)肥的制備及其盆栽應(yīng)用研究。為了制備拮抗菌Z47生物有機(jī)肥并研究其對番茄灰霉病的生防效果和對土壤微生物的影響，將拮抗菌接種于腐熟蛋雞糞有機(jī)肥中，二次發(fā)酵后應(yīng)用于番茄盆栽

6、試驗，定期檢測番茄灰霉病的發(fā)生情況和番茄根際土壤中微生物的變化，并在盆栽結(jié)束時，測定番茄的生物量。結(jié)果表明，拮抗菌Z47生物有機(jī)肥中有效活菌數(shù)達(dá)2×108 CFU/g以上，施用拮抗菌Z47生物有機(jī)肥（處理5）對番茄灰霉病的防效達(dá)到73.67％，顯著高于拮抗菌Z47菌液處理（處理3）和普通有機(jī)肥處理（處理4）;處理5的番茄株高、莖粗、鮮重和干重也顯著高于其它處理，表現(xiàn)出顯著的促生效果;相對于其他處理，處理5使番茄根際土壤中細(xì)菌和真菌數(shù)量顯