Fad2和Fae1基因RNA雙干擾載體的構(gòu)建與轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜的研究.pdf

1、油菜品質(zhì)育種主要以“一高雙低”為主要目的，即育成高油酸、低芥酸、低硫苷的高品質(zhì)材料。在油酸合成途徑的下游有兩條支路，即碳鏈的延長(zhǎng)和減飽和作用，分別由Fael和Fad2基因編碼的兩個(gè)限速酶進(jìn)行調(diào)控。為了抑制這兩個(gè)基因的表達(dá)而使油酸含量不斷提高，本研究克隆了Fad2和Fae，基因5’端保守序列中的一個(gè)片段，長(zhǎng)度分別為349bp和426bp。將這兩個(gè)片段連在一起構(gòu)成一個(gè)復(fù)合片段，然后將這個(gè)復(fù)合片段正反向插入種子特異性表達(dá)NapinA啟動(dòng)子下游

2、查爾酮內(nèi)含子的兩側(cè)，構(gòu)建成種子特異表達(dá)的RNA干擾載體，用于同時(shí)沉默兩個(gè)基因的表達(dá)。干擾體通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜湘油15號(hào)的下胚軸和子葉柄，轉(zhuǎn)化子在除草劑：PPT的選擇壓力下進(jìn)行培養(yǎng)，兩種外植體的PPT篩選濃度分別為4mg/L和3mg/L。目前，已經(jīng)獲得PPT抗性苗和突變株共268株。其中子葉柄得到156株，下胚軸得到112株。PCR檢測(cè)到的轉(zhuǎn)基因苗共有5株。轉(zhuǎn)基因苗目前能正常生長(zhǎng)，并已經(jīng)開花結(jié)果。本研究獲取的轉(zhuǎn)基因種子將為油料作