兩株不同來(lái)源新城疫病毒人工感染SPF雞組織嗜性比較的研究.pdf

1、新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)可以在雞群中引發(fā)以呼吸道、神經(jīng)系統(tǒng)或是腸道病變?yōu)橹饕Y狀，具有高度傳染I生的疾病。以前普遍認(rèn)為水禽對(duì)NDV不致病，即使帶毒也不表現(xiàn)出臨床癥狀。但自1997年來(lái)，在我國(guó)很多地區(qū)相繼發(fā)生由NDV引起的鵝的臨診感染，特別是在華南和華東地區(qū)已形成流行趨勢(shì)。感染鵝群表現(xiàn)較高的發(fā)病率和死亡率，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本文通過(guò)比較鵝源NDV與雞源NDV對(duì)SPF雞組織嗜性的差異，為證明鵝源

2、NDV與雞源NDV的不同提供一個(gè)佐證。 鵝源NDV HLJCF04-1在雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)上進(jìn)行蝕斑純化后，隨機(jī)選擇5個(gè)蝕斑，擴(kuò)增F基因1.5kb片斷進(jìn)行PCR產(chǎn)物直接測(cè)序，選擇序列變異最小蝕斑，接種CEF細(xì)胞獲得的病毒液命名為Go/HLICF04/05(以下簡(jiǎn)稱(chēng)HUCF4)。測(cè)定其最小致死劑量雞胚平均死亡時(shí)間(MDT)為59.6h和F蛋白氨基酸裂解位點(diǎn)為“RRQKRF”均符合強(qiáng)毒特征。以10％EID<,50>/0.1mL

3、鵝源NDV HLJCF04人工感染15日齡SPF雞，同時(shí)建立相同感染劑量組的雞源標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株F<,48>E<,9>陽(yáng)性對(duì)照和PBS陰性對(duì)照。在感染后48h、96h和120h，觀察雞群發(fā)病情況，隨機(jī)取3只雞剖檢檢查病理變化；同時(shí)取腦、哈德氏腺、氣管、肺、盲腸扁桃體、法氏囊(為敘述方便，將腦、哈德氏腺、氣管、肺、盲腸扁桃體和法氏囊按順序稱(chēng)為組織器官)。應(yīng)用雞胚半數(shù)感染量(EID<,50>)和熒光定量(real time)RT-PCR兩種方法動(dòng)

4、態(tài)檢測(cè)HLJCF04和F<,48>E<,9>在組織器官中的病毒滴度。 HLJCF04和F<,48>E<,9>感染組的SPF雞在感染24h內(nèi)發(fā)病，HLJCF04感染組在感染后90h出現(xiàn)死亡雞，感染后144h全部死亡；F<,48>E<,9>感染組在感染后86h出現(xiàn)死亡雞，在感染后120h全部死亡。從發(fā)病率、致死率與病程來(lái)看，HLJCF04與F<,48>柏E<,9>感染組的SPF雞均為100％的發(fā)病率、100％的致死率。表明HLJCF

5、04和F<,48>E<,9>株相似，對(duì)雞有高度的致病性。而F<,48>E<,9>感染組SPF雞平均死亡時(shí)間較HLJCF04組短。提示HLJCF04株的毒力比F<,48>E<,9>弱。 在10日齡SPF雞胚上對(duì)HLJCF04和F<,48>E<,9>感染后48h、96h獲得的組織器官(3只雞取相同的量混合)進(jìn)行病毒分離，除HLJCF04感染組在感染后48h的病雞腦中沒(méi)有分離到病毒外，其它組織器官中均分離到病毒。 通過(guò)雞胚半數(shù)

6、感染量和熒光定量RT-PCR兩種檢測(cè)方法分別對(duì)HLJCF04和F<,48>E<,9>感染后48h、96h、120h獲得的組織器官(3只雞取相同的量混合)中的病毒滴度進(jìn)行測(cè)定。兩種檢測(cè)方法得到的結(jié)果基本上是一致的：HLJCF04和F<,48>E<,9>株的病毒滴度隨感染時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，病毒的最高滴度大體出現(xiàn)在感染后120h。雞胚半數(shù)感染量檢測(cè)結(jié)果：HLJCF04/120h/組織器官中病毒滴度分別為10<'6.0>、10<'5.7>、10

7、<'8.4>、10<'9.3>、10<'10.7>、10<'7.2>EID<,50>/0.1g：F<,48>E<,9>/120h/織器官中病毒滴度分別為10<'5.9>、10<'5.3>、10<'6.3>、10<'7.5>、10<'8.4>和10<'7.7>EID<,50>/0.1g。熒光定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果：HLJCF04/120h組織器官中病毒滴度分別為1.18E+05、3.00E+04、3.68E+08、4.88E+08、1.

8、76E+09、4.14E+05拷貝數(shù)/0.1g；F<,48>E<,9>/120h/組織器官中病毒含量分別為1.15E+05、8.04E+03、2.12E+05、1.71E+08、2.22E+08、6.36E+06拷貝數(shù)/0/1g。 總體上看，HLJCF04株在肺、氣管、盲腸扁桃體和法氏囊中的病毒滴度比F<,48>E<,9>株高，在腦和哈德氏腺中比F<,48>E<,9>株低。通過(guò)在組織器官中的病毒株間滴度差異，反映：與雞源NDVF