百草枯中毒大鼠肺纖維化中DERLIN-1與GRP78的表達.pdf

1、目的:觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解蛋白1(Derlin-1)和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）在百草枯(PQ)中毒大鼠肺纖維化中的表達變化，探討Derlin-1和GRP78在百草枯中毒大鼠的肺纖維化形成過程中的作用。
　　方法:雄性SD大鼠50只，隨機分為染毒組（PQ組）40只和對照組10只，染毒組用濃度為20％的百草枯溶液以1∶50的比例用生理鹽水稀釋后，按15mg/kg劑量一次性腹腔注射給藥染毒，對照組予以等量生理鹽水腹腔注射。染毒組依

2、據(jù)染毒時間的長短隨機分為1D、7D、14D、21D四個亞組，排除腹腔注射藥物后不符合造模標(biāo)準和死亡的大鼠，最后于1d、7d、14d和21d各處死動物6只取肺組織，而對照組則在1d全部處死取肺組織，最后隨機選取6只入實驗。觀察大鼠染毒后的行為學(xué)表現(xiàn)，大鼠肺組織大體形態(tài)和計數(shù)肺系數(shù)，行蘇木素一伊紅（HE）染色和Masson染色觀察肺組織中肺泡炎及肺纖維表象，并進行程度評分;利用免疫組化(IH)檢測大鼠肺組織中GRP78、Derlin-1的表

3、達變化，酶聯(lián)免疫吸附法(Elisa)檢測肺組織勻漿中Derlin-1的表達。
　　結(jié)果:1、一般情況變化:對照組大鼠精神可、呼吸平穩(wěn)、活動自如。染毒組大鼠于染毒后，出現(xiàn)不同程度的精神萎靡、呼吸急促、鼠尾發(fā)紺、蜷縮少動、進食少等，甚至出現(xiàn)死亡。且上述癥狀于1-7天時明顯加重，死亡率高;在7-21天時，大鼠精神、進食較前緩解，但仍有呼吸困難。2、肺組織大體形態(tài):對照組大鼠肺組織呈粉紅色，色澤均勻，質(zhì)地柔軟。染毒組出現(xiàn)程度不同的充血、水

4、腫、局灶性肺實變。肺充血水腫于早期時明顯，后期主要以實變、質(zhì)地變硬、纖維化為主。計數(shù)各組肺系數(shù)，1D、7D、14D組肺系數(shù)均高于對照組(P＜0.05)，7D組最高，而14D和21D組肺系數(shù)與7D比較有所降低(P＜0.05)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;而21D組肺系數(shù)與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。3、HE染色病理表現(xiàn)，肺泡炎程度評分:正常對照組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)完整、清晰。染毒組出現(xiàn)充血、水腫、炎性細胞浸潤，后期出現(xiàn)成纖維細胞增生、

5、膠原沉積。染毒各亞組肺泡炎評分均高于對照組(P＜0.05)。7D組最高，1D組次之，而21D肺泡炎已緩解明顯。4、Masson染色結(jié)果及肺纖維化程度評分:對照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常。染毒組隨時間延長可見逐漸增多的藍染的膠原纖維沉著，部分實變、纖維化。染毒各組肺纖維評分均高于對照組，7D、14D、21D組與對照組相比較(P＜0.05)，具有統(tǒng)計學(xué)意義。而1D組與對照組相比(P＞0.05)，無統(tǒng)計學(xué)意義。且隨染毒時間延長，染毒組各組肺纖維評分

6、越來越高。5、肺組織中Derlin-1蛋白表達:免疫組化結(jié)果顯示，Derlin-1主要表達于支氣管上皮細胞、肺泡上皮細胞和血管內(nèi)皮細胞的胞漿中。Elisa法和免疫組化結(jié)果均提示Derlin-1在正常對照組中表達最低，在染毒組的表達呈先上升后下降的趨勢，于14D組表達最高，21D組有所下降但仍高于1D和7D。染毒各組與正常組的差異(P＜0.05)，具有統(tǒng)計學(xué)意義。6、肺組織中GRP78蛋白表達:結(jié)果顯示，GRP78蛋白主要在支氣管上皮細胞

7、、肺泡細胞及血管內(nèi)皮細胞胞漿中表達。且在1D組表達開始升高，在7D組達到最高，14D組開始有所下降但仍高于1D組，而21D組較14D下降明顯(P＜0.05)，但染毒組表達水平均較對照組高(P＜0.05)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:1、百草枯中毒可成功構(gòu)建大鼠肺纖維化模型。2、百草枯中毒大鼠體內(nèi)出現(xiàn)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)。3、隨著百草枯中毒時間的延長，肺組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白Derlin-1、GRP78表達呈規(guī)律性改變。4、Derl