基于MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路探討清肺培元顆粒對(duì)免疫低下肺部細(xì)菌感染BALB-C小鼠的影響.pdf

1、目的:
　　建立免疫低下肺部感染小鼠模型，探討清肺培元顆粒對(duì)MAPK信號(hào)通路蛋白p38、JNK、ERK的蛋白及mRNA表達(dá)的影響，從而初步探討清肺培元顆粒提高機(jī)體免疫功能、控制炎癥進(jìn)程的作用機(jī)制，為清肺培元顆粒的臨床廣泛應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.動(dòng)物分組
　　第一次分組：將60只清潔級(jí)健康雌性BALB/c小鼠，隨機(jī)分為正常組（12只），造模組（48只）；造模成功后，死亡4只，剩余44只小鼠。第二次分

2、組：將44只小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為4組即：模型組、齊多夫定組（AZT）組、唐草片組、清肺培元顆粒組，每組11只。分別用苦味酸溶液染色標(biāo)記以示區(qū)分。
　　2.模型建立及給藥
　　適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后，一次性給予造模組FLV病毒懸液0.25ml/10g腹腔注射，正常對(duì)照組腹腔注射等體積的0.9％生理鹽水，根據(jù) FLV病毒致病特點(diǎn)，確定造模周期為21d。造模成功后，造模組隨機(jī)分為4組即：模型組、AZT組、唐草片組、清肺培元顆粒組，每

3、組11只。在免疫低下小鼠模型成功的基礎(chǔ)上，腹腔注射10%水合氯醛0.03-0.05ml麻醉后，采用滴鼻法給予Ⅲ型肺炎鏈球菌細(xì)菌懸液50μl進(jìn)行二次造模，根據(jù)Ⅲ型肺炎鏈球菌致病特點(diǎn)，確定造模周期為7天。在確定二次造模成功1d后，開始對(duì)各組小鼠灌胃進(jìn)行相應(yīng)的藥物干預(yù)，齊多夫定組給予齊多夫定藥物懸液（0.08 g/kg.d），連續(xù)14天；唐草片組給予唐草片藥物懸液（2.56g/kg.d），連續(xù)14天；清肺培元組給予清肺培元顆粒藥物懸液（2g/

4、kg.d），連續(xù)14天；正常對(duì)照組、模型組給予0.9%生理鹽水，連續(xù)14天，各組灌藥頻率均為1次/天，給藥體積均為0.2ml·10g-1。
　　3.指標(biāo)檢測(cè)
　　實(shí)驗(yàn)中觀察記錄小鼠的飲食攝水、活動(dòng)情況、皮毛色澤、呼吸狀況等行為特征狀況變化，對(duì)體重、腰圍進(jìn)行動(dòng)態(tài)測(cè)量，末次給藥6小時(shí)后，麻醉使其死亡，無菌操作取出肺臟，左右肺葉分開，標(biāo)記并分別存放于凍存管，-80℃冰箱深凍保存。一部分被用于Western Blot方法測(cè)定各組小鼠

5、肺組織中MAPK信號(hào)通路蛋白p38、JNK、ERK蛋白表達(dá)情況；另一部分被用于Real time PCR方法測(cè)定各組小鼠中MAPK信號(hào)通路蛋白p38、JNK、ERK mRNA表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果：
　　1.各治療組小鼠與模型組對(duì)比一般狀況均有不同程度的改善。
　　2.模型組小鼠肺組織 p38、JNK、ERK蛋白及 mRNA表達(dá)較正常組均顯著升高（P<0.05），藥物干預(yù)后，清肺培元組及其它各治療組均有不同程度地降低

6、。
　　3.對(duì)免疫功能低下肺部感染模型小鼠肺組織 p38蛋白表達(dá)的影響：清肺培元組及其它各治療組與模型組對(duì)比，p38蛋白均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；清肺培元組與唐草片組對(duì)比，p38蛋白表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；清肺培元組與AZT組對(duì)比,兩組p38蛋白表達(dá)無差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4.對(duì)免疫功能低下肺部感染模型小鼠肺組織 JNK蛋白表達(dá)的影響：清肺培元組及其它各治療組與模型組對(duì)

7、比，JNK蛋白均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；清肺培元組與 AZT組對(duì)比，JNK蛋白表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；清肺培元組與唐草片組對(duì)比，JNK蛋白表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　5.對(duì)免疫功能低下肺部感染模型小鼠肺組織 ERK蛋白表達(dá)的影響：清肺培元組及其它各治療組與模型組對(duì)比，ERK蛋白均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；清肺培元組與AZT組對(duì)比，ERK蛋白表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)

8、學(xué)意義（P<0.05）；清肺培元組與唐草片組對(duì)比，兩組 ERK蛋白表達(dá)無差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　6.對(duì)免疫功能低下肺部感染模型小鼠肺組織p38 mRNA的影響：清肺培元組、齊多夫定組、唐草片組與模型組相比，2-△△ct＜0.5，說明清肺培元組、齊多夫定組、唐草片組p38 mRNA表達(dá)較模型組顯著降低；清肺培元組與唐草片組比較，2-△△ct＞2，說明清肺培元組p38 mRNA表達(dá)較唐草片組顯著升高；清肺培元組與齊多

9、夫定組比較，0.5＞2-△△ct＜2，說明清肺培元組p38 mRNA表達(dá)較齊多夫定組表達(dá)無顯著差異。
　　7.對(duì)免疫功能低下肺部感染模型小鼠肺組織 JNK1、JNK2 mRNA的影響：①清肺培元組、齊多夫定、唐草片組與模型組相比，2-△△ct＜0.5，說明清肺培元組、齊多夫定組、唐草片組JNK1 mRNA表達(dá)較模型組顯著降低；清肺培元組與唐草片組比較，2-△△ct＜0.5，說明清肺培元組JNK1 mRNA表達(dá)較唐草片組顯著降低；清

10、肺培元組與齊多夫定組比較，2-△△ct＜0.5，說明清肺培元組JNK1 mRNA表達(dá)較齊多夫定組顯著降低；②清肺培元組、齊多夫定、唐草片組與模型組相比，2-△△ct＜0.5，說明清肺培元組、齊多夫定組、唐草片組JNK2 mRNA表達(dá)較模型組顯著降低；清肺培元組與唐草片組比較，0.5＜2-△△ct＜2，說明兩組JNK2mRNA表達(dá)無顯著差異；清肺培元組與齊多夫定組比較，0.5＜2-△△ct＜2，說明兩組JNK2mRNA表達(dá)無顯著差異；

11、r>　　8.對(duì)免疫功能低下肺部感染模型小鼠肺組織ERK1、ERK2 mRNA的影響：①清肺培元組、齊多夫定組與模型組相比，2-△△ct＜0.5，說明清肺培元組、齊多夫定組ERK1 mRNA表達(dá)較模型組顯著降低；唐草片組與模型組相比，2-△△ct＞2，說明唐草片組ERK1 mRNA表達(dá)較模型組顯著升高；清肺培元組與唐草片組比較，0.5＜2-△△ct＜2，說明兩組ERK1 mRNA表達(dá)無顯著差異；清肺培元組與齊多夫定組比較，2-△△ct＞2

12、，說明清肺培元組p38 mRNA表達(dá)較齊多夫定組顯著升高。②清肺培元組、齊多夫定組與模型組相比，2-△△ct＜0.5，說明清肺培元組、齊多夫定組ERK2 mRNA表達(dá)較模型組顯著降低；唐草片組與模型組相比，0.5＜2-△△ct＜2，說明唐草片組ERK2mRNA表達(dá)較模型組無明顯差異；清肺培元組與唐草片組比較，2-△△ct＜0.5，說明清肺培元組ERK2 mRNA表達(dá)較唐草片組ERK2 mRNA表達(dá)顯著降低；清肺培元組與齊多夫定組比較，2

13、-△△ct＜0.5，說明清肺培元組ERK2 mRNA表達(dá)較齊多夫定組顯著降低。
　　結(jié)論：
　　1.清肺培元顆粒及各治療組可以改善模型小鼠一般狀態(tài)，從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面驗(yàn)證了清肺培元顆粒治療免疫低下肺部感染的有效性。
　　2.模型組小鼠肺組織 p38、JNK、ERK蛋白及其 mRNA表達(dá)明顯增加，提示MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路與免疫低下肺部感染的發(fā)生機(jī)制密切相關(guān)。
　　3.清肺培元顆粒通過抑制 p38、JNK、ERK蛋白通路