家蠶幼蟲(chóng)中腸細(xì)胞的原代培養(yǎng).pdf

1、PrimarycultureofmidgutcellsfromlarvaeofBombyxmori一‘‘submittedt01laeSlSsul9daoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyWuYanlei(DepartmentofAgronomy)Supervisor：LiChangyouQingdaoChin

2、aJune，2012青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要家蠶幼蟲(chóng)中腸細(xì)胞的原代培養(yǎng)摘要中腸在昆蟲(chóng)生命活動(dòng)中起著分泌消化液、消化食物和吸收養(yǎng)分的重要作用，同時(shí)也是生物殺蟲(chóng)劑如蘇云金芽孢桿菌(Bt)、昆蟲(chóng)桿狀病毒、凝集素和蛋白酶抑制劑等先導(dǎo)物的作用靶標(biāo)，因此了解中腸生物學(xué)功能具有重要意義。在活體內(nèi)，中腸結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和中腸細(xì)胞之間廣泛的相互作用使得中腸生理學(xué)、病理學(xué)和毒理學(xué)的研究變得困難，而離體細(xì)胞培養(yǎng)為研究中腸細(xì)胞的功能提供了簡(jiǎn)單、快速和準(zhǔn)確的

3、手段，為病原和寄主相互關(guān)系的研究提供了理想的體外模型。但是中腸細(xì)胞的離體培養(yǎng)存在著細(xì)胞狀態(tài)不好、難以成活、難以傳代等問(wèn)題。究其原因，主要是由于中腸細(xì)胞的分化程度高有關(guān)，對(duì)離體培養(yǎng)的條件要求苛刻，特別是原代培養(yǎng)的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分不充分造成細(xì)胞難以成活，目前所用的培養(yǎng)基中尚缺乏活體培養(yǎng)中的某些因子；其次，中腸組織取材的時(shí)間和中腸細(xì)胞的分離方法的不合適，導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不好，大量死亡，難以成活。針對(duì)中腸細(xì)胞離體培養(yǎng)中出現(xiàn)的難題，本論文主要對(duì)家蠶幼蟲(chóng)

4、中腸細(xì)胞的原代培養(yǎng)進(jìn)行了研究，了解昆蟲(chóng)中腸細(xì)胞類型，測(cè)定出最適合進(jìn)行離體培養(yǎng)的家蠶幼蟲(chóng)的齡期，找到中腸細(xì)胞最適合的分離方法，篩選出合適的培養(yǎng)基配方、血清含量及其生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物，為中腸細(xì)胞系的建立以及中腸生物學(xué)的研究奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下：1對(duì)家蠶幼蟲(chóng)進(jìn)行解剖，觀察到中腸細(xì)胞有柱狀細(xì)胞、杯狀細(xì)胞和再生細(xì)胞，其中，杯狀細(xì)胞與柱狀細(xì)胞的比例為1：5。2對(duì)家蠶不同齡期的幼蟲(chóng)進(jìn)行解剖培養(yǎng)，測(cè)定再生細(xì)胞的含量及其生長(zhǎng)狀態(tài)，結(jié)果表明4齡初幼蟲(chóng)得到的再生細(xì)