越南槐內(nèi)生真菌多樣性、抑菌活性及其次生代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、本研究以采自靖西市誠(chéng)良村(J)、天等縣龍粟村(T)、大新縣上湖村(D)等地的廣西特有珍稀藥用植物越南槐為研究對(duì)象，在對(duì)不同產(chǎn)地越南槐植株不同器官、不同組織的內(nèi)生真菌進(jìn)行分離鑒定的基礎(chǔ)上，進(jìn)行越南槐內(nèi)生真菌的多樣性、抑菌活性及其次生代謝產(chǎn)物研究。主要研究結(jié)果如下。
　　(1)越南槐的根、莖及種子具有種類(lèi)豐富的內(nèi)生真菌。從廣西三個(gè)產(chǎn)地采集越南槐的新鮮根、莖及種子共3種器官樣品，分別取根韌皮部、根木質(zhì)部、莖皮、莖木質(zhì)部、種皮、胚共6種組

2、織進(jìn)行內(nèi)生真菌分離，共得到菌株1 504株;將這些菌株鑒定為分類(lèi)單元95個(gè)，其中確定了分類(lèi)地位73個(gè)，未確定分類(lèi)地位22個(gè)。已確定分類(lèi)地位的分類(lèi)單元?dú)w屬到真菌界3個(gè)門(mén)7個(gè)綱22個(gè)目44個(gè)屬，19個(gè)鑒定到屬水平，54個(gè)鑒定到種水平，其中最豐富的是子囊菌門(mén)有68個(gè)分類(lèi)單元，其次是擔(dān)子菌門(mén)有3個(gè)分類(lèi)單元、接合菌門(mén)有2個(gè)分類(lèi)單元;優(yōu)勢(shì)綱為Sordariomycetes、Eurotiomycetes、Dothideomycetes;優(yōu)勢(shì)目為Hyp

3、ocreales、Eurotiales、Capnodiales、 Pleosporales; 優(yōu)勢(shì)屬為Fusarium、 Penicillium、Cladosporium、Colletotrichum; 優(yōu)勢(shì)種為Fusarium solani、Fusariumoxysporum、 Cladosporium perangustum、Colletotrichum gloeosporioides、Cercospora beticola 。

4、r>　　(2)地理位置、器官類(lèi)型以及種子內(nèi)部組織顯著地影響越南槐內(nèi)生真菌的定殖。三個(gè)產(chǎn)地間越南槐內(nèi)生真菌定殖率具有顯著差異，產(chǎn)地T的最高(30.57％)，產(chǎn)地J的次之(22.07％)，產(chǎn)地D的最低(14.03％);
　　不同器官間內(nèi)生真菌定殖率具有顯著差異，種子的最高(46.67％)，莖的次之(22.40％)，根的最低(14.03％);器官內(nèi)部組織內(nèi)生真菌定殖率比較，種子內(nèi)部組織胚與種皮之間具有顯著差異且胚的最低僅為0.67％，其

5、他器官內(nèi)部組織之間均沒(méi)有顯著差異。
　　(3)地理位置和器官組織類(lèi)型顯著的影響越南槐內(nèi)生真菌群落的組成和分布。在目、屬、種水平上，越南槐內(nèi)生真菌群落的優(yōu)勢(shì)類(lèi)群存在產(chǎn)地間、器官組織間明顯差異;產(chǎn)地間、器官組織間分類(lèi)單元的相似性指數(shù)均極低，分別在0.106 7～0.220 0、0～0.357 9之間;產(chǎn)地、器官共有分類(lèi)單元分析，鑒定的73個(gè)分類(lèi)單元中，三個(gè)產(chǎn)地共有8個(gè)，兩個(gè)產(chǎn)地共有12個(gè)，三個(gè)器官共有4個(gè)，兩個(gè)器官共有13個(gè)，其他分類(lèi)

6、單元只在一個(gè)產(chǎn)地或器官出現(xiàn);產(chǎn)地、組織中相對(duì)多度最高分類(lèi)單元分析，產(chǎn)地T中為Phoma sp.、Phialophora mustea、 Metarhizium anisopliae，產(chǎn)地J中為Neopestalotiopsissp.、Phaeosphaeria sp.，產(chǎn)地D中為Myrothecium verrucaria，根木質(zhì)部中為Cladosporium perangustum，根韌皮部中為Myrothecium verrucar

7、ia、Purpureocillium lilacinum，莖木質(zhì)部中為Cercospora beticola，莖皮中為Neopestalotiopsis sp.、Phaeosphaeria sp.，種皮中為Colletotrichumgloeosporioides、Alternaria alternata，胚中為Pseudocercospora elaeocarpi。
　　(4)越南槐內(nèi)生真菌群落α-多樣性較高(S，95; H'，

8、3.993 8;1-D，0.974 0);產(chǎn)地D的越南槐內(nèi)生真菌群落的α-多樣性顯著低于產(chǎn)地T和產(chǎn)地J，后兩者間差異不明顯;除胚極少定殖真菌外，越南槐其他器官組織不影響內(nèi)生真菌群落的α-多樣性，均定殖同樣豐富的內(nèi)生真菌。
　　(5)越南槐內(nèi)生真菌的抗菌資源豐富。多個(gè)菌株顯示了與宿主相似的強(qiáng)抑菌活性，對(duì)白色念珠菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌等人體病原菌以及水稻細(xì)菌性條斑病菌、柑橘潰瘍病菌、三七黑斑病菌、三七炭疽病菌和三七根腐病菌等植物

9、病原菌具有明顯的抑制作用。在95個(gè)分類(lèi)單元的代表菌株中，21株分別對(duì)白色念珠菌以及4種病原細(xì)菌有較強(qiáng)的抑制作用，10株對(duì)3種三七病原真菌具強(qiáng)的拮抗活性。特別是，對(duì)病原細(xì)菌及白色念珠菌的最小抑菌濃度，GRPH-0（對(duì)白色念珠菌）、TRPH-21（對(duì)大腸桿菌）、TRPH-35（對(duì)金黃色葡萄球菌）、JXRPH-24（對(duì)金黃色葡萄球菌）、JSMXY-17（對(duì)水稻細(xì)菌性條斑病菌）、TRXY-5（對(duì)水稻細(xì)菌性條斑病菌）、JSMXY-17（對(duì)柑橘潰瘍

10、病菌）共7個(gè)菌株的代謝產(chǎn)物分別僅為陽(yáng)性對(duì)照的16倍、16倍、32倍、32倍、16倍、16倍、64倍，且均遠(yuǎn)小于宿主代謝產(chǎn)物的最小抑菌濃度;TRPH-73、TRPH-87、TRXY-46、TRXY-18-1、TRPH-89、TRPH-13、TRXY-34-1共7個(gè)菌株的代謝產(chǎn)物對(duì)3種三七病原真菌菌絲的抑菌活性等于或大于陽(yáng)性對(duì)照，且均比宿主代謝產(chǎn)物強(qiáng);TRPH-73、TRPH-87、TRXY-46、TRPH-89、TRPH-13、TRXY-

11、34-1共6個(gè)菌株的代謝產(chǎn)物對(duì)2種三七病原真菌孢子的最小抑菌濃度范圍為1～2mg.mL-1，僅為陽(yáng)性對(duì)照的4～8倍，小于宿主代謝產(chǎn)物的最小抑菌濃度。
　　(6)菌株TRXY-46含有較豐富的甾體類(lèi)化合物。發(fā)酵培養(yǎng)該菌株150 L，通過(guò)浸泡提取方法得到粗提物220 g并通過(guò)系統(tǒng)梯度洗脫將其分為F1、F2、F3、F4、F5、F6等6個(gè)餾分，通過(guò)各種色譜手段從各餾分中分離化學(xué)成分，利用波譜方法從F1餾分中鑒定了5個(gè)甾體類(lèi)化合物，分別是6

12、β-hydroxystigmast-4-en-3-one（化合物1）、(22E，24R)-5α，8α-epidioxyergosta-6,9(11),22-trien-3β-ol（化合物2）、5,8-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol（化合物3）、(22E,24R)-5α,8α-epidioxy-23-methylergosta-6,22-dien-3β-ol（化合物4）、(22E,24R)-3β,5α-di