DNA修復(fù)基因XPD單核苷酸多態(tài)性與卵巢癌的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的： 卵巢癌是常見的婦科惡性腫瘤，90％以上來自上皮組織。由于卵巢癌迄今仍無完善的早期診斷方法和有效的晚期治療手段，成為威脅廣大婦女生命和健康的主要疾病。卵巢癌的病因目前不十分明確，遺傳和環(huán)境因素的共同作用導(dǎo)致卵巢癌的發(fā)生。環(huán)境致癌物及/或機(jī)體代謝產(chǎn)物攻擊細(xì)胞時，可引起DNA損傷。生物體能夠保持遺傳信息的完整和穩(wěn)定，主要依賴于體內(nèi)一系列DNA修復(fù)系統(tǒng)。DNA損傷的修復(fù)途徑很多，核苷酸切除修復(fù)(NER)是人類最重要的修復(fù)途徑。核

2、苷酸切除修復(fù)(NER)基因具有高度多態(tài)性。DNA修復(fù)基因的多態(tài)性可使機(jī)體修復(fù)損傷DNA的能力有所不同，導(dǎo)致基因的穩(wěn)定性和細(xì)胞的癌變率有所改變。研究表明，DNA修復(fù)能力低下與腫瘤易感性增高相關(guān)。因此，DNA修復(fù)基因多態(tài)性可能是卵巢癌的遺傳易感性因素之一。 本研究旨在探討核苷酸切除修復(fù)基因XPD第10外顯子312密碼子Asp/Asn(即G/A)和第23外顯子751密碼子Lys/Gln(即A/C)單核苷酸多態(tài)性(single nucl

3、eotidepolvmorphism，SNP)與我國北方漢族婦女卵巢癌發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系，從分子生物學(xué)水平為卵巢癌的預(yù)防及診治提供依據(jù)。 方法： 采用基于人群的病例．對照研究方法，以235例卵巢癌患者和246例健康對照個體為研究對象。235例癌患者為2001.12～2006.11于河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)治療的北方籍漢族婦女。所有卵巢癌患者均經(jīng)組織病理學(xué)診斷為上皮性卵巢癌。采用2000年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)的臨

4、床病理分期方法，將卵巢癌分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期。246例正常對照為同一地區(qū)的健康漢族女性個體。 卵巢癌患者組與健康對照組人群在征得本人或其家屬同意后，無菌操作下采集外周靜脈血5ml，采用蛋白酶K-氯化鈉鹽析法提取基因組DNA。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restrictionfragment length polymorphism，PCR—RFLP)分析方法，檢測XP

5、D的多態(tài)性基因型。 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用SPSS11.5版軟件包(SPSS Company，Chicago，Illinois，USA)進(jìn)行，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。比較各位點(diǎn)基因型頻率的觀察值與預(yù)期值并進(jìn)行卡方檢驗(yàn)行Hardy-Weinberg平衡分析。病例組與對照組的基因型分布比較采用行×列表卡方檢驗(yàn)。單體型頻率及連鎖不平衡分析采用EH軟件和2LD軟件(1.2 version，RockefellerUniversity，Ne

6、w York)。以非條件Logistic回歸法計算相對風(fēng)險度的比值比(odds ratio，OR)及其95％可信區(qū)間(confidence interval，CI) 結(jié)果： 1 XPD基因第10外顯子G/A SNP及第23外顯子A/C SNP基因型分布在健康對照組中均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。 2 XPD基因第10外顯子G/A SNP的G/G、G/A、A/A基因型頻率在卵巢癌患者組和健

7、康對照組中分別為80.9％、19.1％、0和85.0％、15.0％、0，因無A/A基因型的存在，將G/A與A/A基因型合并,兩組間比較基因型頻率分布無顯著性差異(P>0.05)。以G/G基因型為參照，G/A基因型不能增加卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(OR=0.747，95％CI=0.464～1.205)。卵巢癌患者組和健康對照組的G、A等位基因頻率分別為90.4％、9.6％和92.5％、7.5％，兩組比較無顯著性差異(P>0.05)。 3

8、XPD基因第23外顯子A/C SNP的A.A、A/C、C/C基因型頻率在卵巢癌患者組和健康對照組中分別為77.9％、20.9％、1.2％和81.3％、18.3％、0.4％，兩組間基因型頻率分布無顯著性差異(P>0.05)。以A/A基因型為參照，A/C和C/C基因型與其相比不能增加卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(OR=1.235．95％CI=0.792～1.927)。卵巢癌患者組和對照組的A、C等位基因頻率分別為88.3％、11.7％和90.4％、9.

9、6％兩組比較無顯著性差異(P>0.05)。 4 將卵巢癌患者按照病理類型分為四組，即漿液性卵巢癌、粘液性卵巢癌、宮內(nèi)膜樣卵巢癌及低分化腺癌。將XPD基因兩個多態(tài)位點(diǎn)的基因型和等位基因型頻率在四個病理類型組的分布分別與正常對照組相比，發(fā)現(xiàn)XPD基因第23外顯子A/C SNP的等位基因型頻率在漿液性卵巢癌和正常對照間的分布存在一定的差異趨勢(X<'2>=3.629,P=0.057)，C等位基因?yàn)闈{液性卵巢癌的可疑危險等位基因OR=1

10、.64，95％CI=0.903～2.979)。 5 將卵巢癌患者按FIGO分期分組后，XPD基因第10外顯子G/A SNP的基因型頻率在早期、晚期兩組人群中的分布無顯著性差異(X<'2>=2.03Z P=0.154)。XPD基因第23外顯子A/C SNP的基因型頻率在早期、晚期兩組人群中的分布有顯著性差異，即攜帶C等位基因(A/C或C/C)的個體更容易發(fā)生卵巢癌的浸潤和轉(zhuǎn)移(OR=2.205，95％CI=1.038～4.688，

11、P=0.037)。 6 應(yīng)用EH和2LD軟件對XPD基因第10外顯子G/A和第23外顯子A/C SNP位點(diǎn)進(jìn)行的聯(lián)合分析顯示，兩個多態(tài)位點(diǎn)間存在連鎖不平衡現(xiàn)象(D'=0.524386，X<'2>=104.17，P=0.00)，XPD基因第10外顯子的G等位基因易與第23外顯子的A等位基因連鎖。G/A單體型在人群中最常見，占83.7％。單體型分布在卵巢癌患者組與健康對照組間無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1

12、 XPD基因第10外顯子G/A和第23外顯子A/C SNP可能與中國北方漢族婦女上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)。但XPD基因第23外顯子A/C SNP的A、C等位基因型頻率在漿液性卵巢癌和正常對照組間的分布存在一定的差異趨勢，C等位基因可能為漿液性卵巢癌的可疑危險等位基因。 2 XPD基因第23外顯子A/C SNP的基因型頻率在早期卵巢癌和晚期卵巢癌的分布存在顯著性差異，A/C、C/C基因型可能成為卵巢癌患者手術(shù)病理分期的一個分層標(biāo)