支氣管哮喘與JKAP單核苷酸多態(tài)性的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、背景: IKK 復(fù)合體相關(guān)蛋白(IKAP)被認(rèn)為是組成IκB激活酶(IKKs)的重要基質(zhì)蛋白，能調(diào)節(jié)IKKs三種激酶IKK α、IKKβ和NIK的活化，對(duì)于NF-κ B的激活、入胞、靶基因轉(zhuǎn)錄起著重要的調(diào)節(jié)作用，并因此導(dǎo)致促炎癥因子的產(chǎn)生增加，促進(jìn)包括支氣管哮喘在內(nèi)的炎癥的發(fā)生和發(fā)展。國外的一些研究發(fā)現(xiàn)IKAP基因存在中數(shù)個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，其中某些多態(tài)性位點(diǎn)與兒童或成人支氣管哮喘的易感性及IgE水平升高有關(guān)。 目的:研究IKK復(fù)合體

2、相關(guān)蛋白(IKAP)基因編碼區(qū)第3214bp和3473bp是否存在單核苷酸多態(tài)性(SNP)及其與江西地區(qū)漢族人群支氣管哮喘易感性、血清總IgE水平的關(guān)系。 方法:研究對(duì)象分為支氣管哮喘組和正常對(duì)照組兩組，支氣管哮喘組共病例91例，其中男44例，女47例，性比為0.94，年齡9歲～52歲，平均年齡26.4±8.0歲；正常對(duì)照組共83例，其中男35例，女48例，性比為0.73，年齡17～47歲，平均年齡25.9±7.1歲。所有研究對(duì)

3、象均為江西地區(qū)漢族人，個(gè)體間無親緣關(guān)系，年齡、性別構(gòu)成比均相近。研究時(shí)采集研究對(duì)象個(gè)人資料及病史資料，抽取研究對(duì)象數(shù)ml外周血。其中一部分血以枸椽酸鹽抗凝，使用基因組DNA提取試劑盒提取外周血白細(xì)胞基因組DNA。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)方法進(jìn)行目的基因擴(kuò)增及多態(tài)性位點(diǎn)檢測，即先用聚合酶鏈反應(yīng)分別擴(kuò)增兩段目的基因，分別包括編碼區(qū)第3214bp和第3473bp，再以限制性核酸內(nèi)切酶HinfⅠ或Kpn Ⅰ

4、酶切處理擴(kuò)增產(chǎn)物，酶切產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠水平電泳，最后用凝膠分析系統(tǒng)檢測核酸條帶以判斷是否目的基因位點(diǎn)是否有多態(tài)性。直接測序法驗(yàn)證PCR擴(kuò)增產(chǎn)物是否為目的基因。另一部分血經(jīng)離心析出血清，將血清以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定支氣管哮喘組與正常對(duì)照組血清總IgE水平。利用SPSS for windowsV13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，分析支氣管哮喘患者組和正常對(duì)照組IKAP基因兩個(gè)單核苷酸位點(diǎn)基因變異現(xiàn)象與哮喘易感性、血清總IgE水平的

5、關(guān)系，以P＜0.01表明有非常顯著性差異，P＜0.05表明有顯著性差異。 結(jié)果:(1)支氣管哮喘患者血清總IgE水平明顯高于正常對(duì)照者血清總IgE水平(P＜0.05)。(2)江西地區(qū)漢族人群IKAP基因存在著3214bp位點(diǎn)T→A和3473bp位點(diǎn)C→T兩個(gè)單核苷酸多態(tài)性變異位點(diǎn)。(3)支氣管哮喘患者與正常對(duì)照者IKAP基因3214bp位點(diǎn)等位基因及基因型有非常顯著性差異(P＜0.01)。支氣管哮喘患者IKAP基因3214bp位

6、點(diǎn)等位基因變異型(A)高于野生型(T)，正常對(duì)照者IKAP基因3214bp位點(diǎn)等位基因變異型(A)低于野生型(T)；基因型變異型(T/A和A/A)多于野生型(T/T)。(4)支氣管哮喘患者與正常對(duì)照者IKAP基因3473bp位點(diǎn)等位基因及基因型無顯著性差異(P＞0.05)。支氣管哮喘患者及正常對(duì)照者IKAP基因3473bp位點(diǎn)變異的等位基因(T)均低于野生型(C)。(5)IKAP基因3214bp位點(diǎn)變異型(T/A和A/A)者血清總IgE

7、水平明顯高于野生型(T/T)者(P＜0.05)；而3473bp位點(diǎn)變異型(C/T和T/T)者血清總IgE水平與野生型(C/C)者無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論:(1)江西漢族人群IKAP基因3214bp和3473bp位點(diǎn)存在單核苷酸多態(tài)性變異。(2)IKAP基因3214bp位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與支氣管哮喘易感性相關(guān)，此位點(diǎn)基因突變可能是江西地區(qū)漢族人群支氣管哮喘的易感因素之一；而3473bp位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與支氣管哮喘易感