胰高血糖素樣肽-1對乳鼠心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的影響及其相關(guān)機制研究.pdf

1、本文對胰高血糖素樣肽-1對乳鼠心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的影響及其相關(guān)機制進行了研究。文章分為兩個部分。
　　 第一部分不同濃度胰高血糖素樣肽-1對乳鼠心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的作用研究。
　　 目的：通過體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞建立缺氧/復(fù)氧(H/R)模型，給予不同濃度的胰高血糖素樣肽-1進行干預(yù)，觀察胰高血糖素樣肽-1對心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的作用。
　　 方法：⑴用胰蛋白酶消化法體外原代培養(yǎng)乳鼠心室肌細(xì)胞，通過倒置相

2、差顯微鏡形態(tài)學(xué)觀察以及心肌α肌動蛋白免疫熒光法進行鑒定。⑵選用培養(yǎng)72h的單層心肌細(xì)胞，實驗分為以下7組：正常對照組、單純H/R組、H/R+GLP-1(0.1nmol/l)組、H/R+GLP-1(1nmol/l)組、H/R+GLP-1(10nmol/l)組、H/R+GLP-1(100nmol/l)組、H/R+GLP-1(1000nmol/l)組。⑶化學(xué)比色法測定乳酸脫氫酶(LDH)的釋放，黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)的活性

3、，硫代巴比妥酸顯色法測定丙二醛(MDA)含量。⑷通過流式細(xì)胞術(shù)來檢測心肌細(xì)胞的凋亡。
　　 結(jié)果：①經(jīng)各項鑒定培養(yǎng)細(xì)胞為心肌細(xì)胞，且純度可達(dá)90％以上；②LDH的活性、MDA含量及SOD的活性：與正常對照組相比，單純?nèi)毖?復(fù)氧后，LDH的活性顯著增加(83.76±12.21vs16.84±4.43，P＜0.05)，超氧化物歧化酶(SOD)的活性明顯降低(20.00±4.74vs64.52±6.47，P＜0.05)，丙二醛(MDA

4、)含量顯著增多(53.74±8.41vs3.90±0.90，P＜0.05)，GLP-1預(yù)處理后進行H/R，可較大程度地逆轉(zhuǎn)上述指標(biāo)變化，與H/R組相比均具有顯著性差異(P＜0.05)，并且隨著GLP-1濃度逐漸增加至10nmol/l(0.1 nmol/l、1nmol/l、10nmol/l)時LDH活性逐漸下降，MDA含量逐漸下降，SOD的活性逐漸升高，當(dāng)GLP-1濃度大于10nmol/l隨著濃度增加(10nmol/l、l00nmol/l

5、、1000nmol/l)，與10nmol/l組相比上述指標(biāo)改變無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。③心肌細(xì)胞凋亡率：正常對照組細(xì)胞集中在B3區(qū)，在B4區(qū)和B2區(qū)內(nèi)幾乎無分布，凋亡率為1.2±2.08；H/R組出現(xiàn)大量凋亡細(xì)胞，并有部分壞死細(xì)胞，其凋亡率為29.1±4.78，較正常對照組顯著升高，P＜0.05；GLP-1+H/R組可顯著減少B4區(qū)和B2區(qū)的細(xì)胞分布，即減少細(xì)胞凋亡和壞死，與H/R相比其凋亡率顯著降低，(P＜0.05)，且在一定的

6、濃度范圍內(nèi)即GLP-1≤10nmol/l時，心肌細(xì)胞的凋亡率的下降呈現(xiàn)濃度依賴性(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：⑴缺氧/復(fù)氧可以誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷；⑵胰高血糖素樣肽-1對心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷具有保護作用，且最佳保護濃度為10nmol/l。
　　 第二部分胰高血糖素樣肽-1通過P38MAPK信號通路對心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護作用相關(guān)機制分研究。
　　 目的：①選擇P38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的特異性抑制劑SB20

7、3580觀察胰高血糖素樣肽-1對缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞損傷的作用變化。②分析胰高血糖素樣肽-1是否通過P38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑發(fā)揮對缺氧/復(fù)氧所致?lián)p傷的心肌細(xì)胞的保護作用
　　 方法：⑴用胰蛋白酶消化法體外原代培養(yǎng)乳鼠心室肌細(xì)胞；⑵心肌細(xì)胞隨機分為5組：①正常對照組②單純?nèi)毖?復(fù)氧(H/R)組③H/R+GLP-1(10nmol/l)組④H/R+GLP-1(10nmol/l)+SB203580(p38 MAPK抑制劑)(5μmol/

8、L)組⑤缺氧/復(fù)氧+SB203580(p38 MAPK抑制劑)(5μmol/L)組；⑶倒置相差顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞形態(tài)的變化，采用化學(xué)比色法測定乳酸脫氫酶(LDH)的釋放，黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)的活性，硫代巴比妥酸顯色法測定丙二醛(MDA)含量；⑷流式細(xì)胞術(shù)檢測心肌細(xì)胞的凋亡。
　　 結(jié)果：①與正常對照組相比，單純H/R后，細(xì)胞生長狀態(tài)較差，心肌細(xì)胞偽足縮短或消失，折光性下降，搏動減弱甚至消失。乳酸脫氫酶(L

9、DH)的釋放量增加，超氧化物歧化酶(SOD)的活性明顯降低，丙二醛(MDA)含量顯著增多，細(xì)胞凋亡率增多。②胰高血糖素樣肽-1預(yù)處理心肌細(xì)胞后進行缺氧/復(fù)氧，可較大程度地逆轉(zhuǎn)上述指標(biāo)變化，與H/R組相比均具有顯著性差異(P＜0.05)，而與H/R+GLP-1組相比，H/R+GLP-1+SB203580組增強了上述保護作用(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：⑴胰高血糖素樣肽-1可以顯著保護H/R所致的心肌細(xì)胞損傷，具有抗心肌細(xì)胞凋亡保