Wnt-β-catenin信號通路在HBx基因體外誘導(dǎo)大鼠卵圓細胞惡化過程中的作用.pdf

1、目的：探討Wnt/β-catenin信號通路在HBx基因體外誘導(dǎo)大鼠卵圓細胞惡化過程中的作用，為闡明HBx基因和卵圓細胞在肝癌發(fā)生過程中的作用和機制奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：建立轉(zhuǎn)染HBx基因并表達穩(wěn)定的卵圓細胞系(pEGFP-HBx-LE/6)，用LE/6卵圓細胞及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pEGFP質(zhì)粒的LE/6卵圓細胞(pEGFP-LE/6)作為對照細胞，運用Real-time PCR、細胞免疫化學染色法、細胞免疫熒光法和Western bl

2、ot等技術(shù)觀察和檢測上述三種細胞在Wnt/β-catenin信號通路中關(guān)鍵因子β-catenin、cyclin D1及c-myc的表達差異，并分別運用倒置相差顯微鏡和透射電鏡、MTT法和流式細胞術(shù)觀察和檢測上述三種細胞的細胞形態(tài)、細胞增殖和細胞周期的變化。設(shè)計并且合成特異的β-catenin的siRNA干擾序列片段，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染pEGFP-HBx-LE/6卵圓細胞，細胞計數(shù)法檢測轉(zhuǎn)染干擾片段后實驗組與對照組細胞的增殖情況。
　　

3、 結(jié)果：與對照組細胞相比，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HBx基因的卵圓細胞（pEGFP-HBx-LE/6）明顯上調(diào)Wnt/β-catenin信號通路中的關(guān)鍵因子β-catenin，從而導(dǎo)致下游靶基因cyclin D1及c-myc的表達上升（p<0.05）；光鏡和電鏡結(jié)果示pEGFP-HBx-LE/6卵圓細胞的體積增大且細胞核具有不規(guī)則異型；MTT法檢測細胞增殖結(jié)果顯示pEGFP-HBx-LE/6卵圓細胞的增殖較對照組細胞快；流式細胞儀檢測細胞周期結(jié)果顯示相