可移動(dòng)元件整合子與細(xì)菌多重耐藥性的關(guān)系研究.pdf

1、目的:
　　調(diào)查多重耐藥銅綠假單胞菌株中可移動(dòng)性遺傳元件的分布情況，并以整合子為對(duì)象深入研究，探究整合子中不同可變區(qū)啟動(dòng)子Pant對(duì)耐藥基因盒和整合酶的表達(dá)以及整合頻率的影響，了解啟動(dòng)子Pant在整合子介導(dǎo)的耐藥機(jī)制中的作用，從而為控制細(xì)菌廣泛耐藥和新型抗菌藥物的研發(fā)提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　從臨床標(biāo)本中分離并篩選出49株多重耐藥的銅綠假單胞菌，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)分析21種可移動(dòng)遺傳元件的分布情況，

2、并對(duì)可移動(dòng)元件的組合形式進(jìn)行分析;構(gòu)建高表達(dá)整合酶基因的重組質(zhì)粒pET-INT和同時(shí)含有無耐藥基因盒整合子和aadA2基因盒的重組質(zhì)粒pACYC-IN-AAD，通過表型篩選法測定其整合頻率;通過點(diǎn)突變法構(gòu)建含有不同可變區(qū)啟動(dòng)子的重組質(zhì)粒，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR比較其aadA2基因和intI1基因的表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　49株多重耐藥銅綠假單胞菌菌株中，共檢出11種可移動(dòng)遺傳元件相關(guān)遺傳標(biāo)記基因，4個(gè)種類的可移動(dòng)性遺傳元件

3、均有檢出。陽性率最高的為IS26(77.6％)，其次為intI1(67％)。于國內(nèi)首次在多重耐藥銅綠假單胞菌中檢出traF基因;本研究成功構(gòu)建了整合子剪切和捕獲耐藥基因盒的體外模型，研究發(fā)現(xiàn)，在BL21(DE3)菌株中，含有高表達(dá)整合酶的整合子對(duì)耐藥基因盒的整合能力是無高表達(dá)整合酶整合子的9.41倍;不同可變區(qū)啟動(dòng)子下游基因盒中基因的轉(zhuǎn)錄水平有顯著差異，4種質(zhì)粒的aadA2基因轉(zhuǎn)錄水平從高到低依次為:MU2＞pACYC-IN-AAD＞M