高爾夫球場(chǎng)狗牙根葉斑病病原學(xué)的研究.pdf

1、狗牙根草坪葉斑病是發(fā)生在高爾夫球場(chǎng)上的一種重要病害。2003-2005年，從湖北省武漢市金銀湖高爾夫球場(chǎng)與紅蓮湖高爾夫球場(chǎng)上采集狗牙根草葉斑病標(biāo)本。對(duì)葉部病斑進(jìn)行組織分離，并將分離的菌株進(jìn)行單孢純化和致病性測(cè)定。對(duì)致病菌株進(jìn)行了形態(tài)學(xué)與分子鑒定、生物學(xué)特性研究以及對(duì)四種草坪草的侵染過程觀察，研究結(jié)果如下。 1．形態(tài)學(xué)鑒定的結(jié)果表明該菌株為澳大利亞平臍蠕孢（Bipolaris australiensis）。核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（rD

2、NA-ITS）序列測(cè)定的結(jié)果表明，該菌株與GenBank中登陸號(hào)為AY923860的澳大利亞旋孢腔菌（Cochliobolus australiensis）序列同源性達(dá)到99.61％。 2．致病性測(cè)定結(jié)果表明，菌絲塊接種及孢子懸浮液接種均能使健康植株葉片出現(xiàn)圓形或者不規(guī)則形褐色病斑，而且從病斑邊緣病健交界處又重新分離到該病原菌。綜合致病性測(cè)定和形態(tài)學(xué)及分子鑒定結(jié)果，確認(rèn)該病病原為Bipolaris australiensis，這

3、是中國(guó)關(guān)于澳大利亞平臍蠕孢在高爾夫球場(chǎng)狗牙根草坪草上引起葉斑病的首次報(bào)道。 3．寄主范圍測(cè)定結(jié)果表明，小麥、水稻、玉米、早熟禾、日本結(jié)縷草、高羊茅、黑麥草、匍匐剪股穎均為澳大利亞平臍蠕孢的寄主。 4．生物學(xué)特性研究結(jié)果表明，病原菌在15-35℃溫度范圍內(nèi)都能夠產(chǎn)孢，以20-30℃最為適宜。在10-30℃范圍內(nèi)隨著溫度的升高，產(chǎn)孢量逐漸增加，到30℃產(chǎn)孢量達(dá)到高峰。適合菌絲體生長(zhǎng)的溫度為15-38℃，以25-35℃最為適宜

4、。40℃菌絲停止生長(zhǎng)。pH值在2.76-10.75范圍內(nèi)菌絲體均能生長(zhǎng)，其中以4.84-8.65最為適宜。在pH值在2.76-10.75范圍內(nèi)均可產(chǎn)孢，其中產(chǎn)孢最適宜pH值范圍為4.84-6.41，偏酸性條件下有利于產(chǎn)孢。在供試的7種碳源中，以甘露醇和乳糖菌絲體生長(zhǎng)勢(shì)最好，以麥芽糖菌絲長(zhǎng)勢(shì)最差。產(chǎn)孢量則以乳糖為最高，以蔗糖最低。在供試的7種氮源之中，NaNO<,3>最有利于菌絲生長(zhǎng)，而菌絲體利用蛋白胨和甘氨酸效果最差。含KNO<,3>培

5、養(yǎng)基產(chǎn)孢量最高，含蛋白胨培養(yǎng)基產(chǎn)孢量最低。 PDA平板毒力測(cè)定結(jié)果表明，10％多氧霉素B粉劑、25％阿米西達(dá)乳油、80％代森錳鋅粉劑、50％克菌丹粉劑、50％多菌靈粉劑、30％愛苗乳油、10％世高顆粒劑，其EC50依次為5912.965μg／ml、1135.283μg／ml、21.33029μg／ml、18.24744μg／ml、9.6468μg／ml、1.148368μg／ml、0.526344μg／ml。其中10％世高顆粒劑

6、抑菌效果最好，10％多氧霉素B粉劑抑菌效果最差。 5．將濃度為5×10<'6>個(gè)孢子／ml澳大利亞平臍蠕孢分生孢子懸浮液噴施于生長(zhǎng)20d左右的雜交狗牙根、高羊茅、早熟禾、黑麥草、早熟禾等幾種草坪草活體葉片上，在23～25℃，Rh＝95％條件下?lián)嵊?。接種后不同時(shí)間點(diǎn)取樣，對(duì)樣品進(jìn)行組織透明、染色，觀察病原菌對(duì)寄主植物的侵染過程。結(jié)果表明，在四種寄主上接種后3h內(nèi)可以觀察到分生孢子的萌發(fā)，6h之內(nèi)可以觀察到附著胞的形成，在24h之內(nèi)