灰樹花多糖降血糖活性及作用機理的研究.pdf

1、灰樹花是一種重要的真菌研究資源，無論是子實體，發(fā)酵液，還是菌絲體均能分離純化出多種生物活性物質(zhì)。從發(fā)酵液中分離純化得到的灰樹花胞外多糖(GFP)已初步被證實具有降血糖的功能，然而通過建立細胞模型研究灰樹花胞外多糖的降血糖活性并對其作用機理進行探討還未見相關(guān)報道。
　　本實驗利用液體深層發(fā)酵培養(yǎng)，通過醇提的方法得到灰樹花胞外多糖，經(jīng)過葡聚糖凝膠色譜(SephadexG-200)、超濾等方法對活性組分進行分離純化，同時利用活性跟蹤檢測

2、各組分體外抑制α-葡萄糖苷酶活性，篩選得到活性較高的組分(GFP-2);并通過葡聚糖凝膠色譜法(G-75)和高效液相層析色譜分析鑒定GFP-2是分子量約為45300Da，純度較高的宏觀均一組分;對其理化性質(zhì)分析，GFP-2是一種含有β型糖苷鍵和吡喃糖環(huán)的非淀粉類，不含蛋白和核酸的中性多糖;通過體外高濃度胰島素共同孵育人肝癌細胞(HepG2)建立胰島素抵抗細胞模型，以GFP-2為研究對象，研究其降血糖活性，并對其改善胰島素抵抗的作用機理進

3、行探討，證實GFP-2具有較強的提高糖代謝效率和緩解胰島素抵抗的活性。
　　通過免疫印跡檢測可知，GFP-2與細胞膜接觸活化胰島素受體蛋白(IRS)并促進磷脂酰肌醇3激酶(Pi3k)的110-β亞基的活化并轉(zhuǎn)移至下游信號蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶(Akt)并使之473位絲氨酸磷酸化，p-AktSer473抑制糖原合成酶激酶-3(GSK-3)并促進糖原代謝的活化;與此同時檢測糖異生關(guān)鍵酶（葡萄糖6磷酸酶，G-6-p），糖酵解關(guān)鍵酶（丙酮