活化富血小板血漿上清液移植在心肌梗死后組織修復(fù)中的作用：血小板旁分泌機制與心肌梗死后心室重塑.pdf

1、目的：干細胞治療心肌梗死的臨床試驗未體現(xiàn)出與動物實驗一致的良好療效，出現(xiàn)這一矛盾的原因尚不明確。臨床試驗和動物實驗的較大差別之一是在臨床試驗中患者常采取抗血小板治療。抗血小板治療抑制了血小板的黏附、聚集，同時也抑制了血小板的釋放功能。血小板的分泌顆粒(致密顆粒、α-顆粒和溶酶體)可釋放多種蛋白如血小板源性生長因子(Platelet Derived Growth Factor，PDGF)、血小板因子4(Platelet Factor 4，

2、PF<,4>)和vW因子(Von Willebrand Factor，vWF)等，同時循環(huán)的血小板還攜帶如血小板內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial GrowthFactor，VEGF)、基質(zhì)源性因子(Stromal．Derived Factor-1，SDF-1)和堿性成纖維生長因子(Basic Fibroblast Growth Factor，bFGF)等一類的因子。根據(jù)文獻報道，這些因子對各種損傷的愈合有著重要的促

3、進作用。因此,血小板的釋放功能在損傷愈合中所起的作用有可能在抗血小板治療中被抑翩，而在動物實驗中卻不存在這一現(xiàn)象。于是我們設(shè)想臨床上抗血小板治療對血小板釋放功能的抑制有可能是導(dǎo)致各大隨機對照雙盲臨床試驗與基礎(chǔ)研究結(jié)果不盡一致的原因之一。 本實驗通過向大鼠梗死心肌內(nèi)注射血小板釋放因子，旨在檢測移植活化后富血小板血漿上清液在大鼠心肌梗死后修復(fù)中的作用，初步探討激活的血小板在心肌梗死后組織修復(fù)中的作用。 方法：經(jīng)腹主動脈抽取健

4、康成年Wistar大鼠的血液，采用二次離心法制作富血小板血漿(Platelet Rich Plasma，PRP)和貧血小板血漿(Platelet Poor Plasma，PPP)，凝血酶激活后提取上清液，低溫凍存。選取6-8周Wistar大鼠，隨機分為PRP組、對照組和假手術(shù)組；結(jié)扎Wistar大鼠冠脈前降支建立急性心肌梗死模型，結(jié)扎大鼠冠脈前降支后立即向缺血的周邊區(qū)域注射100μL富血小板血漿上清液或貧血小板上清液。于術(shù)后第7天和28

5、天處死動物，一部分大鼠用含有15％KCl的冰PBS灌流后立即行壓力-容積曲線測定，另一部分大鼠用冰PBS灌流后低溫凍存用以組織學(xué)分析。心肌組織橫斷面切片經(jīng)過天狼猩紅染色后，在偏振光顯微鏡下結(jié)合圖像分析軟件分析梗死壁厚度、梗死面積、膨展程度，在環(huán)形偏振光顯微鏡下結(jié)合圖像分析軟件分析膠原重構(gòu)；采用免疫組化方法，于熒光顯微鏡下結(jié)合圖像分析軟件分析新生血管內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞以及心肌橫斷面積。 結(jié)果：相對于對照組，PRP組28天舒張壓力

6、-容積曲線左移，提示PRP組梗死后左室整體擴張程度減小。PRP組7天和28天梗死區(qū)游離壁厚度大于對照組。PRP組28天梗死面積小于對照組。PRP組7天的膨展指數(shù)小于對照組；PRP組28天的膨展指數(shù)較對照組有減小的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異。7天和28天PRP組和對照組梗死區(qū)以及室間隔的膠原容積分數(shù)均呈上升的趨勢，7天和28天PRP組梗死區(qū)膠原容積分數(shù)均較對照組明顯增高；雖無統(tǒng)計學(xué)差異，但PRP組室間隔的膠原容積分數(shù)有比對照組減小的趨勢。環(huán)形偏

7、振光顯微鏡下綠、黃、橙、紅色膠原反應(yīng)了膠原由細至粗的過程，7天梗死區(qū)PRP組的綠色膠原含量比對照組明顯增多，28天梗死區(qū)PRP組的綠色膠原含量比對照組明顯減少，而28天梗死區(qū)PRP組的橙色膠原比對照組明顯增多。7天和28天PRP組非梗死區(qū)心肌細胞橫斷面積明顯小于對照組。7天和28天PRP組梗死區(qū)和非梗死區(qū)小動脈長度密度大于對照組。7天和28天PRP組梗死區(qū)和非梗死區(qū),毛細血管密度大于對照組。 結(jié)論：活化富血小板血漿上清液移植可改