取材時(shí)期對水曲柳合子胚外植體體細(xì)胞胚胎發(fā)生的影響.pdf

1、水曲柳(FraxinusmandshuricaRupr.)為木犀科白蠟樹屬的落葉喬木，是東北林區(qū)珍貴的3大硬闊葉樹種之一，同時(shí)也是我國東北地區(qū)重要的用材樹種和園林綠化樹種。本研究以不同取材時(shí)期水曲柳合子胚的子葉為外植體誘導(dǎo)體細(xì)胞胚胎發(fā)生，確立合子胚的最佳取材時(shí)期，并對體細(xì)胞胚的成熟、萌發(fā)、生根的影響因素如培養(yǎng)基的種類、激素的濃度和種類以及蔗糖和瓊脂的濃度等進(jìn)行了探討，探索了體細(xì)胞胚萌發(fā)到實(shí)現(xiàn)正常轉(zhuǎn)株的可能性途徑。首次在有關(guān)水曲柳體細(xì)胞胚

2、胎發(fā)生研究的基礎(chǔ)上針對取材時(shí)期這一影響因素進(jìn)行系統(tǒng)的研究，逐步完善體細(xì)胞胚胎發(fā)生體系，為實(shí)現(xiàn)植株再生奠定基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下： (1)取材時(shí)期是水曲柳合子胚體細(xì)胞胚胎發(fā)生的關(guān)鍵影響因素之一。7月中旬(授粉后大約9周)取材的未成熟合子胚其體細(xì)胞胚誘導(dǎo)率較高，而且體細(xì)胞胚的質(zhì)量較好；而7月初(授粉后8周左右)和9月中旬(授粉后大約17周)取材的合子胚體細(xì)胞胚發(fā)生率較低。因此，我們確定了水曲柳合子胚的最佳取材時(shí)期是7月中旬。 (

3、2)不同取材時(shí)期水曲柳合子胚的子葉在MS1/2基本培養(yǎng)基上同時(shí)添加不同濃度的生長素NAA和細(xì)胞分裂素BA即可誘導(dǎo)出體細(xì)胞胚，二者濃度適當(dāng)時(shí)體細(xì)胞胚的發(fā)生多以直接發(fā)生為主，誘導(dǎo)的體細(xì)胞胚數(shù)量多、質(zhì)量高；當(dāng)初生體細(xì)胞胚發(fā)生后，較易產(chǎn)生次生胚。最終篩選出誘導(dǎo)水曲柳體細(xì)胞胚發(fā)生的最佳激素組合：MS1/2+BA0.5mg·L+NAA1.5，2.5mg·L-1，誘導(dǎo)率達(dá)到35.32％； (3)水曲柳體細(xì)胞胚萌發(fā)培養(yǎng)基選取MS和MS1/2，并

4、附加不同濃度的NAA，結(jié)果表明體細(xì)胞胚在MS1/2培養(yǎng)基上萌發(fā)率較高，并且在子葉胚的胚根及下胚軸處可以不斷產(chǎn)生大量的次生胚；篩選出體細(xì)胞胚萌發(fā)的最佳組合是MS1/2+NAA0.01mg·L-1，萌發(fā)率可達(dá)24.8％。 (4)水曲柳的體胚苗生根難是一個(gè)亟待解決的難題。在體胚苗生根培養(yǎng)中，確定了體胚苗生根的最佳組合：MS1/2+NAA0.01mg·U1+20g·L-1蔗糖+7g·L-1瓊脂。(5)進(jìn)一步驗(yàn)證了水曲柳體細(xì)胞胚胎的發(fā)生有