遺傳性非綜合征型耳聾的分子機(jī)制研究.pdf

1、耳聾是最常見的出生缺陷，也是最常見的感覺神經(jīng)性疾病。據(jù)我國2006年殘疾人抽樣調(diào)查結(jié)果顯示聽力殘疾（含多重殘疾）人共2，780萬，并以每年新生3萬聾兒的速度增長。要提高防聾治聾的水平，最重要的是要更深入地了解耳聾的病因和發(fā)病機(jī)理。隨著導(dǎo)致耳聾的各種環(huán)境因素逐步得到控制，遺傳因素在耳聾病因上的重要性日漸突出，研究遺傳性耳聾的病因和發(fā)病機(jī)理，尋找能夠預(yù)測(cè)、減少后代耳聾再發(fā)風(fēng)險(xiǎn)及新的治療方法，對(duì)于提高防聾治聾的水平、減少人群中耳聾發(fā)病率進(jìn)而提

2、高我國人口素質(zhì)有重要的現(xiàn)實(shí)和長遠(yuǎn)意義。本研究正是針對(duì)非綜合征型遺傳性耳聾進(jìn)行了病因及發(fā)病機(jī)理的研究，按三個(gè)家系分成三部分。
　　 一、X連鎖非綜合征性聾（DFN2）致病基因（PRPS1）的鑒定及PRS1突變后的功能研究
　　 本課題組韓冰碩士在前期研究中，鑒定了一個(gè)X連鎖遺傳性非綜合征型耳聾家系（GZ-Z052）的致病基因PRS1，發(fā)現(xiàn)第193位核苷酸由鳥嘌呤變?yōu)橄汆堰剩╟-193G>A），使第65位氨基酸由天冬氨酸變?yōu)?/p>

3、天冬酰胺（p.D65N）。該基因所在區(qū)域（Xq22）與已報(bào)道的尚未找到致病基因的三個(gè)DFN2家系的致病基因定位區(qū)域重疊。為了探索PRPS1是否就是DFN2（DFNX1）的致病基因，本研究對(duì)上述三個(gè)家系進(jìn)行了PRS1基因的突變篩查，在每一個(gè)家系中都發(fā)現(xiàn)了突變，分別是：c.259G>A（p.A87T），c.869T>C（p.1290T）和c.916G>A（p.G306R），這幾個(gè)突變都與各自家系的耳聾表型共分離。來自正常人的DNA樣品共10

4、25條X染色體經(jīng)測(cè)序未發(fā)現(xiàn)PRS1基因上述4個(gè)位點(diǎn)突變。
　　 對(duì)來自GZ-Z052家系8個(gè)成員的紅細(xì)胞和經(jīng)培養(yǎng)的皮膚成纖維細(xì)胞的PRPS用離子對(duì)反相HPLC法測(cè)定酶活性，發(fā)現(xiàn)患者的紅細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的酶活性分別是正常對(duì)照者酶活性的56％和55％。原核表達(dá)的6個(gè)PRPS1突變體酶（其中4個(gè)為本課題發(fā)現(xiàn)的突變，另2個(gè)為文獻(xiàn)報(bào)道的引起PRPS酶活性下降而導(dǎo)致綜合征性耳聾的突變位點(diǎn)）進(jìn)行酶活性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)相對(duì)于野生型酶，6個(gè)突變體的酶活

5、性都是下降的。本課題發(fā)現(xiàn)的4個(gè)突變體的酶活性介于野生型和文獻(xiàn)報(bào)道的引起PRPS1酶活性下而導(dǎo)致綜合征性耳聾的突變位點(diǎn)之間。表明DFN2家系是由于PRPS1基因突變后酶活性部分下降所致。
　　 二、X連鎖非綜合征性聾家系（SX-Z089）致病基因的鑒定及產(chǎn)前基因診斷
　　 經(jīng)表型及遺傳方式分析，將SX-Z089家系判定為X連鎖非綜合征型耳聾家系。該家系男性患者的顳骨CT檢查有典型的DFN3的CT影像學(xué)特征。行候選基因篩查時(shí)

6、，發(fā)現(xiàn)DFN3的致病基因POU3F4基因存在c.647G>A（p.G216E）突變，與家系耳聾表型共分離。該突變?cè)诙辔锓N間保守，在110例正常人中未發(fā)現(xiàn)上述突變，從而判定該突變?yōu)镾X-Z089家系的致病基因。對(duì)該家系中一名孕18周的攜帶者取羊水對(duì)胎兒DNA進(jìn)行檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)胎兒為c.647G>A（p.G216E）突變半合子，提示該胎兒會(huì)復(fù)制家系中男性患者的表型。為此家庭提供了明確的遺傳咨詢依據(jù)。
　　 對(duì)該家系進(jìn)行線粒體全序列測(cè)序篩

7、查時(shí)，發(fā)現(xiàn)9名母系成員攜帶mtDNA961de1T/insC（n）突變，但此突變不與耳聾表型共分離，且家系耳聾已歸因于POU3F4基因突變，表明mtDNA 961de1T/insC（n）突變不是該家系耳聾的病因。曾有報(bào)道m(xù)tDNA 961de1T/insC（n）突變與藥物性耳聾相關(guān)，但在SX-Z089家系中多人攜帶此突變，且有明確氨基糖甙類藥物使用史而不出現(xiàn)耳聾。所以，mtDNA 961de1T/insC（n）突變的致病性需進(jìn)一步確認(rèn)。

8、
　　 三、常染色體顯性非綜合征型遺傳性耳聾家系（HN-J069）致病基因的定位研究
　　 經(jīng)表型和遺傳方式分析，將HN-J069家系判定為常染色體顯性遺傳性非綜合征型耳聾家系，在該家系中首先對(duì)22個(gè)已知的常染色體顯性遺傳性耳聾基因位點(diǎn)進(jìn)行了連鎖分析，排除了這些已知基因?yàn)樵摷蚁刀@的致病基因的可能。SNP芯片全基因組連鎖分析發(fā)現(xiàn)5號(hào)染色體160-190cM之間的LOD值接近2，對(duì)應(yīng)于第5號(hào)染色體長臂5q33.3-5q35