不同時機就用促紅細(xì)胞生成素對感染所致新生大鼠腦損傷的保護作用.pdf

1、背景和目的：
　　圍生期感染是導(dǎo)致早產(chǎn)及早產(chǎn)兒腦損傷的一個重要原因，腦白質(zhì)損傷(White matter injury，WMI)是早產(chǎn)兒腦損傷中最常見、最嚴(yán)重的類型之一，嚴(yán)重影響早產(chǎn)兒的生命健康和生存質(zhì)量。有研究表明，出生后感染是早產(chǎn)兒神經(jīng)發(fā)育不良結(jié)局的重要危險因素之一。目前許多研究已應(yīng)用細(xì)菌脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）建立了感染所導(dǎo)致的新生兒腦損傷動物模型，最常見的為宮內(nèi)感染及生后感染所致新生兒腦損傷模

2、型;現(xiàn)有報道中LPS常見應(yīng)用途徑包括腹腔注射、靜脈注射或腦內(nèi)注射等。目前關(guān)于早產(chǎn)兒腦損傷尚缺乏有效防治手段，其中促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO）作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)一個新的神經(jīng)營養(yǎng)及保護因子，許多動物實驗及臨床試驗已證實外源性EPO能夠透過血腦屏障進入到腦組織，對新生兒腦損傷有保護作用，顯示較好的應(yīng)用前景。目前對EPO用于感染所致早產(chǎn)兒腦損傷保護作用的最佳方案（應(yīng)用時機、劑量、給藥間隔等）尚不明確，本實驗采用腹腔注射L

3、PS制備生后感染誘導(dǎo)的新生大鼠腦損傷模型，旨在探討EPO對生后感染所致早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷保護作用的最佳應(yīng)用時機及其相關(guān)機制，為臨床應(yīng)用EPO防治腦損傷提供理論依據(jù)。
　　材料與方法：
　　將130只P2新生SD大鼠，隨機分為對照組（A組）50只、LPS感染組(B組)50只、早期EPO干預(yù)組（C組）20只、晚期EPO干預(yù)組（D組）10只。A、B、C組新生大鼠連續(xù)5天（P2-P6）分別腹腔注射相應(yīng)藥物:等容積的生理鹽水+等容積的E

4、PO空白對照品、0.6mg/kgLPS+等容積的EPO空白對照品、0.6mg/kgLPS+5000IU/kgEPO;D組新生大鼠連續(xù)5天（P2-P6）腹腔注射0.6mg/kgLPS，最后一次注射后24h開始連續(xù)腹腔注射5天（即P7-P11）5000IU/kgEPO。
　　A、B兩組分別于P2（腹腔注射第一次藥物后6h）、P7、P12，各隨機抽取10只新生大鼠取腦以矢狀縫為標(biāo)志分為左右半腦，右側(cè)腦-80℃冷存，用于ELISA方法檢測

5、腦組織EPOR蛋白水平;左側(cè)腦組織存于液氮中用于RT-PCR方法檢測EPORmRNA水平;A、B、C三組于P7隨機選取10只新生大鼠灌注取腦，余10只續(xù)養(yǎng)，四組均于D組最后一次用藥后24h(P12)灌注取腦，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測腦組織MBP、GFAP、EPOR表達(dá)，采用HE染色觀察各組大鼠腦組織病理改變。
　　結(jié)果：
　　1.不同組別新生大鼠腦組織病理改變
　　對照組新生大鼠腦組織海馬錐體細(xì)胞排列整齊、層次清晰;L

6、PS感染組細(xì)胞界限不清、層次紊亂，細(xì)胞數(shù)目減少;EPO干預(yù)組較LPS感染組細(xì)胞層次清晰，早期干預(yù)組效果更明顯。對照組側(cè)腦室無擴張，腦室周圍白質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚，灰白質(zhì)界限明顯，周圍神經(jīng)元排列整齊;LPS感染組腦室周圍白質(zhì)有囊性軟化區(qū)域形成，且有腦室擴張情況;EPO干預(yù)組均未見明顯軟化灶，腦室擴張情況較LPS感染組減輕，早期EPO干預(yù)組較晚期干預(yù)組更明顯。
　　2.各組新生大鼠腦組織MBP的表達(dá)
　　LPS感染組較對照組MBP表達(dá)明顯

7、減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);早期EPO干預(yù)組與晚期EPO干預(yù)組MBP表達(dá)較LPS感染組表達(dá)增多，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);早期EPO干預(yù)組較晚期EPO干預(yù)組MBP表達(dá)增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.各組新生大鼠腦組織GFAP的表達(dá)
　　7日齡LPS感染組較對照組GFAP表達(dá)明顯增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);EPO干預(yù)組GFAP表達(dá)與LPS感染組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)

8、。12日齡LPS感染組較對照組GFAP表達(dá)明顯增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);早期EPO干預(yù)組與晚期EPO干預(yù)組GFAP表達(dá)較感染組表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);早期EPO干預(yù)組較晚期EPO干預(yù)組GFAP表達(dá)減少，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.LPS對新生大鼠腦組織EPOR及EPORmRNA表達(dá)的影響
　　免疫組化顯示:P7時感染組EPOR表達(dá)較對照組明顯增多，兩組平均積分光密度值（IO

9、D值）差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);P12時感染組較對照組表達(dá)仍增多，兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。ELISA方法測定EPOR蛋白水平表達(dá)及RT-PCR檢測EPORmRNA表達(dá)發(fā)現(xiàn):(1)感染組較對照組EPOR與EPOR mRNA表達(dá)增加，其中P2與P7時，感染組與對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，P12時兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。(2)隨日齡增加EPOR與EPORmRNA表達(dá)呈下降趨勢，感染組與對照組均為