吡格列酮對STZ誘導的糖尿病大鼠胃和皮膚免疫損傷的抑制作用.pdf

1、第一部分吡格列酮對鏈脲佐菌素(STZ)誘導的糖尿病大鼠胃和皮膚免疫球蛋白沉積的影響
　　 目的:糖尿病是一組以慢性血糖升高為特征的代謝性疾病群,隨病情進展可出現(xiàn)全身各系統(tǒng)病變,嚴重影響患者生存質(zhì)量。其機制復雜,尚未完全明確。目前糖尿病治療以控制血糖為主,但這并不能完全阻斷糖尿病的病程和急、慢性并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。近年來研究表明免疫和炎癥在糖尿病及其慢性并發(fā)癥的發(fā)生中起了重要的作用,而吡格列酮為噻唑烷二酮類藥物,是PPAR-γ的配體

2、,作為胰島素增敏劑被應(yīng)用于臨床,具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)的作用,故我們擬從吡格列酮對STZ誘導的糖尿病大鼠多器官免疫球蛋白沉積的影響入手,探討其作用機制,同時探究糖尿病胃和皮膚病變的發(fā)病機理,為臨床治療提供理論依據(jù)。
　　 方法：96只雄性SD大鼠,隨機抽取12只作為正常對照組(H),其余大鼠以STZ造模,成模后進行血糖分層,隨機分為小劑量吡格列酮治療組(A,4mg/kg/d)、大劑量吡格列酮治療組(B,20mg/kg/d)、小劑量毗

3、格列酮加胰島素治療組(C,吡格列酮4mg/kg/d加甘精胰島素4u/kg/d)、環(huán)孢素A治療組(D,環(huán)孢素A1mg/kg/d)、環(huán)孢素A加胰島素治療組(E,環(huán)孢素A1mg/kg/d加甘精胰島素4u/kg/d),胰島素治療組(F,甘精胰島素4u/kg/d),糖尿病未治療組(G),成模16周后處死全部動物。留取血、尿標本檢測血白蛋白、肝腎功能、血脂、尿微量白蛋白。留取胃、皮膚組織標本做HE、甲苯胺藍染色觀察光鏡病理變化和肥大細胞的表達情況,

4、通過免疫組化和免疫熒光染色檢測這兩個器官的IgA、IgG、和IgM的沉積情況,并通過Image-Pro Plus6.0進行圖像分析。
　　 結(jié)果：糖尿病大鼠模型于注射STZ1周內(nèi)造模成功,16周后各組糖尿病大鼠均出現(xiàn)肌酐、尿素氮、尿蛋白的升高,吡格列酮組較糖尿病未治療組升高值低,而肝功能無明顯改變。藥物治療后各組糖尿病大鼠隨機血糖無明顯降低,但C、E、F組空腹血糖較A、B、D、G組低。糖尿病大鼠可見胃粘膜嗜酸細胞增多,胃排空粘液

5、細胞增多,內(nèi)環(huán)肌層肌細胞出現(xiàn)較多空泡。而皮膚變得菲薄,過度角化,上皮腳變少,毛囊皮脂腺萎縮,毛萎縮。胃粘膜和皮膚均有肥大細胞數(shù)量增加的表現(xiàn)。各組糖尿病大鼠胃和皮膚IgA、IgG、和IgM的沉積強于對照組,而藥物干預(yù)組均弱于糖尿病未治療組,吡格列酮加胰島素組免疫球蛋白沉積最少,大劑量吡格列酮組和環(huán)孢素治療組的免疫球蛋白沉積情況相似,而小劑量吡格列酮組免疫球蛋白沉積與胰島素組相似。
　　 結(jié)論：STZ誘導的糖尿病大鼠胃和皮膚存在病理

6、改變及免疫球蛋白的沉積,推斷STZ誘導的糖尿病大鼠出現(xiàn)了胃和皮膚的損傷,免疫反應(yīng)可能參與了這一損傷過程。吡格列酮治療可以減少上述器官免疫球蛋白的沉積量,較單純胰島素治療組強,提示吡格列酮具有不依賴血糖水平的免疫抑制作用,且實驗所用劑量對肝腎功能無不良影響。
　　 第二部分:STZ誘導的糖尿病大鼠胃、皮膚病變中MCP-1和NF-κB的表達情況及毗格列酮對其表達的影響
　　 目的:前一階段的研究發(fā)現(xiàn),糖尿病大鼠的胃和皮膚免疫

7、球蛋白IgA、IgG、和IgM的的沉積較正常組強,提示免疫損傷在糖尿病大鼠胃病變和皮膚病變中起作用,而免疫反應(yīng)與炎癥之間有密切的聯(lián)系,免疫系統(tǒng)的激活是二者共同的特征。因此,本試驗通過了解糖尿病大鼠胃、皮膚MCP-1和NF-κB的表達情況進一步研究炎癥反應(yīng)在相應(yīng)器官病變中所起的作用及吡格列酮能否通過減少炎癥因子的表達,減少凋亡來發(fā)揮抗炎作用。
　　 方法：實驗動物和分組同上。采用免疫組化的方法對DM大鼠胃、皮膚MCP-1和NF-κ

8、B的表達進行定位定量檢測,通過Image-Pro Plus6.0及SPSS11.5軟件比較各組指標表達的強弱。
　　 結(jié)果：糖尿病大鼠胃和皮膚MCP-1和NF-κB的表達均強于正常組,糖尿病治療組較糖尿病未治療組弱,吡格列酮加胰島素組和環(huán)孢素A加胰島素組最弱,吡格列酮組和環(huán)孢素治療組的免疫球蛋白沉積情況相似,小劑量吡格列酮組與胰島素組相似。
　　 結(jié)論：糖尿病大鼠胃和皮膚MCP-1和NF-κB的表達上調(diào),提示炎癥損傷的存