烏塌菜種質(zhì)資源ISSR反應(yīng)體系的建立及其遺傳多樣性分析.pdf

1、烏塌菜(BrassicacampestrisL.ssp.chinensisvar.rosularis Tsen)又名塌菜、塌地松、塌棵菜、黑菜等,為十字花科(Cruciferae)蕓薹屬蕓薹種白菜亞種的一個變種。原產(chǎn)中國,早期主要分布在長江流域,因其營養(yǎng)豐富,尤以經(jīng)霜雪后風(fēng)味獨(dú)特而被全國各地廣泛栽培。
　　烏塌菜種質(zhì)資源豐富,品種數(shù)量眾多,遺傳背景復(fù)雜,各地區(qū)之間的引種較為普遍,出現(xiàn)同名異種、同種異名現(xiàn)象,因此研究烏塌菜遺傳多樣性

2、對烏塌菜種質(zhì)資源保護(hù)、新品種選育和改良具有重要意義。目前,尚未見有利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行烏塌菜遺傳多樣性分析的報道。本研究利用單因素和正交試驗(yàn)建立并優(yōu)化了烏塌菜ISSR-PCR體系,利用該體系對烏塌菜的遺傳多樣性進(jìn)行分析,本試驗(yàn)主要研究結(jié)果如下:
　　1.采用單因素濃度梯度試驗(yàn)和正交優(yōu)化相結(jié)合的方法,建立了烏塌菜ISSR-PCR擴(kuò)增體系,并在此基礎(chǔ)上對退火溫度和循環(huán)數(shù)進(jìn)一步優(yōu)化,最終確立了適合烏塌菜ISSR-PCR反應(yīng)的最佳

3、體系和程序。即20μLPCR反應(yīng)體系含:30ng模板DNA,0.50μmol?L-1引物,0.25mmol?L-1dNTP,1.0mmol?L-1Mg2+,1.0UTaqDNA聚合酶。PCR擴(kuò)增程序?yàn)?94℃預(yù)變性3min;94℃變性30s,50.1℃退火1min,72℃延伸90s,35個循環(huán);72℃延伸7min,4℃保存。
　　2.用5條引物和8份烏塌菜種質(zhì)材料對已建立的體系進(jìn)行穩(wěn)定性檢測,結(jié)果顯示該體系程序穩(wěn)定可靠,可用于烏塌

4、菜的分子鑒別和遺傳多樣性分析。
　　3.從60條ISSR引物中篩選出9條,采用已優(yōu)化的反應(yīng)體系,首次對48份烏塌菜材料DNA進(jìn)行擴(kuò)增。利用NTSYSpc2.10e軟件對ISSR-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)據(jù)矩陣進(jìn)行UPGMA統(tǒng)計分析。結(jié)果表明:48份烏塌菜材料進(jìn)行ISSR-PCR擴(kuò)增共獲得103條帶,平均每條引物可擴(kuò)增出11.4條擴(kuò)增條帶,其中多態(tài)性條帶有85條,多態(tài)性比率達(dá)82.52％,得到的遺傳相似度表顯示,遺傳相似度在0.5922-