水稻紋枯菌拮抗細菌的篩選及其活性代謝產(chǎn)物的分離與鑒定.pdf

1、紋枯病（Sheath blight）是由立枯絲核菌(Rhizoctonia solani Kühn)引起的世界性水稻病害，近年來有日益加重之勢。在我國主要依賴井岡霉素防治，但長期、大范圍的應用帶來了環(huán)境生態(tài)和抗藥性問題。因此，為了提高綜防效益，很有必要探索新的防治策略和方法。從土壤中篩選高效拮抗菌株、分離鑒定其拮抗活性組分或化合物用于該病害的生物防治具有廣泛的應用前景。
　　本文通過平板稀釋法和平板對峙法從蔬菜根際土壤中篩選出1株

2、水稻紋枯菌的高效拮抗細菌,命名為 kwkjT4?；谛螒B(tài)、生理生化特征及16S rDNA序列分析對其分類地位進行了鑒定，利用毒性平板法測定其體外抑菌活性，采用種子細菌化溫室試驗測定其防治效果。研究了菌株的最適生長條件和拮抗活性物質產(chǎn)生的最適條件。探討了幾種不同極性的有機溶劑提取抑菌活性成分的效果。利用薄層層析和硅膠柱層析分離技術，結合以水稻紋枯病菌為指示菌的抑菌活性測定，從菌株的無細胞發(fā)酵濾液中分離抑菌活性物質組分，并采用氣相色譜/質譜

3、聯(lián)用（GC/MS）對其活性抑菌組分進行了化合物的初步鑒定。結果表明：
　　1、kwkjT4菌株具有明顯的體外抑菌活性，相對抑菌率為55.1％；對水稻紋枯病的溫室防效達61.9%，效果相當于井岡霉素噴霧，提示該菌株在水稻紋枯病的生物防治方面具有較好的應用前景。
　　2、 kwkjT4菌株初步鑒定為假紫色色桿菌(Chromobacterium pseudoviolaceum)。這是C. pseudoviolaceum拮抗水稻紋枯

4、病菌的首次報道。
　　3、分泌抗菌物質，即抗生作用，是 kwkjT4菌株拮抗機理之一。菌株最適生長條件為 pH7.0，溫度32°C，培養(yǎng)時間為36 h，轉速180 rpm，接種量3%。抑菌活性物質產(chǎn)生的最適培養(yǎng)條件為 pH6.0，溫度28°C，培養(yǎng)時間為48 h，轉速180 rpm，接種量3%，表明兩者并不一致。
　　4、乙酸乙酯是最佳提取溶劑，可以從 kwkjT4菌株無細胞發(fā)酵濾液萃取出絕大部分抑菌活性代謝產(chǎn)物,萃取相的抑

5、菌活性為53.4%。
　　5、通過硅膠柱層析，從乙酸乙酯萃取物中分離出5個組分（Fr.1-5），其中Fr.2組分的抑菌活性最強，對紋枯病菌生長的抑制率為67.3%，其次是Fr.4(46.2%)和 Fr.3(28.5%)，F(xiàn)r.1和 Fr.5沒有抑菌活性。進一步從 Fr.2中分離出3個亞組分（Fr.2-1-3），其中 Fr.2-2亞組分對紋枯菌的抑菌效果最好，抑菌活性達72.4%。
　　6、從 Fr.2-2中分離并鑒定出13種