玉米花粉萌發(fā)的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、花粉萌發(fā)和花粉管生長(zhǎng)是種子植物有性生殖的重要環(huán)節(jié)之一。由于花粉在植物有性生殖過(guò)程中的特殊作用和花粉管極性生長(zhǎng)的特性,多年來(lái)一直是研究細(xì)胞分裂、分化及細(xì)胞識(shí)別等重要生命過(guò)程的模型。目前對(duì)花粉管極性生長(zhǎng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面的研究已取得較大進(jìn)展,但對(duì)花粉萌發(fā)過(guò)程中蛋白質(zhì)組的變化及蛋白質(zhì)的鑒定的研究仍較少。
　　 本研究以玉米花粉為材料,運(yùn)用雙向電泳結(jié)合串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)鑒定了玉米花粉萌發(fā)過(guò)程中差異表達(dá)的蛋白質(zhì),并對(duì)差異蛋白進(jìn)行分析。主要研究結(jié)果

2、如下:
　　 1.建立了一套適合玉米花粉雙向凝膠電泳體系。本研究采用pH4-7的11cm線性IPG預(yù)制膠條進(jìn)行第一向等電聚焦,低電壓主動(dòng)水化上樣,聚焦總量達(dá)到55000vhr。第二向使用12％SDS.PAGE膠。電泳后使用考馬斯亮藍(lán)R350染色。此體系得到的雙向電泳圖譜清晰,蛋白質(zhì)點(diǎn)形狀規(guī)則,重復(fù)性好,能較好地滿足后續(xù)串聯(lián)質(zhì)譜鑒定要求。
　　 2.選擇成熟花粉(PO)和離體萌發(fā)1小時(shí)花粉(P1)進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析。在雙向

3、凝膠上得到470個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn),其中28個(gè)點(diǎn)的表達(dá)豐度在P0和P1間差異較為顯著。鑒定了21種蛋白質(zhì),其中13個(gè)表達(dá)豐度上升,主要包括花粉管壁的修飾(果膠甲酯酶,高爾基體結(jié)合蛋白)、肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架組織(肌動(dòng)蛋白)、能量代謝(ATP酶亞基1、異檸檬酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶、焦磷酸酶、葡萄糖-1-磷酸酯尿甙基轉(zhuǎn)移酶等)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)(RabGDP解離抑制因子、腺苷激酶)、蛋白質(zhì)的折疊與加工(線粒體加工肽酶、蛋白質(zhì)二硫化物異構(gòu)酶)等；8個(gè)蛋白質(zhì)的表達(dá)