貴州葡萄屬野生種快速繁殖及離體再生研究.pdf

1、葡萄扦插技術(shù)不能獲得大量的脫毒苗，傳統(tǒng)的育種技術(shù)很難獲得抗病葡萄品種，組織培養(yǎng)技術(shù)對葡萄無病毒株系的建立和轉(zhuǎn)基因葡萄育種的研究提供了技術(shù)支持。而葡萄轉(zhuǎn)基因工程目前發(fā)展的瓶頸是葡萄再生頻率低，轉(zhuǎn)化率低。本研究以原產(chǎn)于貴州葡萄屬野生種毛葡萄、刺葡萄和腺枝葡萄的單芽莖段、葉片、葉柄和不帶芽莖段為試材，利用均勻設(shè)計進(jìn)行快速繁殖和離體再生，并對影響快繁和再生的不同因素進(jìn)行了研究，以建立貴州葡萄屬野生種離體快繁和再生的技術(shù)體系，為野生材料的大量繁殖

2、、離體保存提供技術(shù)和材料支撐，為葡萄遺傳轉(zhuǎn)化奠定理論和技術(shù)基礎(chǔ)。主要取得了以下研究結(jié)果：
　　1.葡萄屬野生種無菌系建立
　　4-6月取毛葡萄新梢，消毒8min后接種在MS+BA2.0mg?L-1+IBA0.2mg?L-1培養(yǎng)基上適宜誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)及繼代培養(yǎng)，誘導(dǎo)率可達(dá)47.1％；刺葡萄的腋芽誘導(dǎo)適宜培養(yǎng)基為B5+ZT1.0mg?L-1+NAA0.01mg?L-1（誘導(dǎo)率達(dá)95.6％）；誘導(dǎo)腺枝葡萄腋芽萌發(fā)的適宜培養(yǎng)基為MS+

3、BA1.0mg?L-1+NAA0.2mg?L-1，誘導(dǎo)率可達(dá)50.0％。
　　成熟的毛葡萄種子經(jīng)10％濃H2SO4浸泡10min后培養(yǎng)在1/2MS+IBA0.8mg?L-1上培養(yǎng)效果好（萌芽率100％），而腺枝葡萄種子需經(jīng)過98％濃H2SO4浸泡30min后培養(yǎng)在1/2MS+BA0.2mg?L-1+GA0.3mg?L-1+IBA0.8mg?L-1上效果較好。
　　2.葡萄屬野生種快速繁殖體系的建立
　　毛葡萄不同單株單

4、芽外植體增殖和生根需要的培養(yǎng)條件存在差異，增殖培養(yǎng)基均為附加不同濃度BA和IBA的MS培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)基為附加不同濃度IBA和IAA的1/2MS培養(yǎng)基。其中‘花溪-4’增殖培養(yǎng)基為MS+BA2.0mg?L-1+IBA0.07mg?L-1，增殖率是100％，繁殖系數(shù)是19.7，生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.15mg?L-1+IAA0.20mg?L-1，生根率達(dá)100.0％。
　　3.葡萄屬野生種再生體系的建立
　　以毛葡萄

5、試管苗的無芽莖段（帶葉葉柄）為材料，切成0.5cm小段接種在培養(yǎng)基中，莖段培養(yǎng)在MS+BA3.0～3.5mg?L-1+IBA0.1mg?L-1或MS+BA1.0mg?L-1+KT2.8mg?L-1+IBA0.01mg?L-1上易誘導(dǎo)愈傷組織，誘導(dǎo)率為100.0％,培養(yǎng)在MS+BA2.5mg?L-1+KT0.0001mg?L-1上愈傷組織增殖和分化效果好，其增殖率為100.0％，分化率達(dá)到62.9％；葉柄培養(yǎng)在MS+BA2.5mg?L-1

6、+KT0.16mg?L-1上易誘導(dǎo)直接再生不定芽，再生率達(dá)到77.5％，培養(yǎng)在1/2MS+IBA0.19mg?L-1+IAA0.70mg?L-1上誘導(dǎo)直接再生根效果好，生根率為85.7％；
　　切取毛葡萄再生不定芽的單芽外植體培養(yǎng)在1/2MS+BA0.2mg?L-1+IBA0.2mg?L-1+IAA0.6mg?L-1上繼代培養(yǎng)效果好，腋芽增殖率達(dá)97.5％，繁殖系數(shù)為12.6；培養(yǎng)在1/2MS+IBA0.08mg?L-1+IAA0

7、.14mg?L-1上易誘導(dǎo)再生芽生根成苗，其生根率達(dá)100.0％。
　　將毛葡萄葉片切成0.5cm×0.5cm方塊，且垂直主脈方向用刀片劃三刀比不經(jīng)過刀片處理的葉片愈傷組織誘導(dǎo)增殖與分化效果好，帶葉葉柄比不帶葉葉柄更利于促進(jìn)再生。
　　研究中還發(fā)現(xiàn)MS培養(yǎng)基利于誘導(dǎo)毛葡萄不定芽再生，不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑BA、KT和IBA組合利于促進(jìn)毛葡萄葉柄和莖段再生，而BA、IBA、IAA與一定濃度的蔗糖組合利于促進(jìn)毛葡萄葉片再生,本