不結球白菜游離小孢子培養(yǎng)及胚胎發(fā)生相關基因的分離.pdf

1、游離小孢子培養(yǎng)(Isolated Microspore Culture， IMC)技術在作物遺傳育種上具有重要作用，通過這一技術可以快速獲得純合的育種材料系統(tǒng)，縮短育種年限，提高育種效率；還可以獲得雙單倍體(DH)群體用于遺傳分析、遺傳圖譜構建和分子標記等研究。因此，深入完善該技術并對其進行分子機制方面研究具有重要意義。本研究旨在進一步優(yōu)化不結球白菜游離小孢子培養(yǎng)技術并從中分離與游離小孢子胚胎發(fā)生相關的基因。具體研究內容如下：
　

2、　 1、研究了基因型、低溫處理、熱激處理和高糖濃度處理對不結球白菜游離小孢子胚胎發(fā)生的影響。結果顯示：不同基因型材料小孢子胚胎發(fā)生能力明顯不同；對供體花蕾進行1或3d的低溫預處理能顯著提高出胚率，超過5d則明顯降低，并且不同基因型對低溫預處理的反應不同；熱激處理對小孢子胚胎發(fā)生起關鍵作用，不同基因型所要求的最佳熱激溫度和時間不同；以17％的高糖濃度培養(yǎng)基對游離小孢子進行1～4d預處理能顯著提高出胚率，隨處理時間的延長效果降低，但在1～

3、4d范圍內胚誘導率均高于對照。
　　 2、以‘上海605’、‘高華’的子葉型小孢子胚為外植體，研究冷處理、活性炭及AgNO3對小孢子植株再生的影響，并對再生植株染色體倍性進行鑒定。結果表明：對小孢子胚進行5d的4℃冷處理培養(yǎng)能提高其胚芽誘導率和胚芽數(shù)；培養(yǎng)基中添加1.0g/L的活性炭對提高小孢子胚芽誘導率沒有明顯效果，但能有效減輕胚芽的玻璃化；添加5.0或7.0mg/L的AgNO3對小孢子胚芽誘導有顯著效果。染色體倍性鑒定結果表

4、明：不結球白菜小孢子植株的染色體自然加倍率較高，在50％～100％之間；不同基因型不結球白菜小孢子植株的倍性變異具有多樣性；在部分基因型中嵌合體占較高比例，最高達到42.86％。
　　 3、為了解游離小孢子胚胎發(fā)生的分子機制，以‘五月慢’為試材，利用cDNA-AFLP技術分離與小孢子胚胎發(fā)生相關的特異表達片段，并進行克隆與分析。通過256對引物組合的篩選，共分離得到94個與小孢子胚胎發(fā)生相關的表達序列標簽(EST)，對其中15個