葡萄糖氧化酶基因?qū)λ镜倪z傳轉(zhuǎn)化及表達(dá)分析.pdf

1、葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase，GO）能氧化葡萄糖產(chǎn)生過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫不僅對(duì)病原菌具有直接殺傷作用，而且可作為信號(hào)分子激活植物一系列防衛(wèi)基因的表達(dá)，使植物產(chǎn)生系統(tǒng)獲得性抗性。研究還發(fā)現(xiàn)，在不親和的植物一病原互作中氧化激增產(chǎn)生的過(guò)氧化氫不僅可作為區(qū)域信號(hào)導(dǎo)致細(xì)胞死亡，而且還可以作為擴(kuò)散信號(hào)誘導(dǎo)周圍未侵染細(xì)胞中防衛(wèi)基因如谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶基因的表達(dá)。 本研究將葡萄糖氧化酶基因插入具有除草劑選擇標(biāo)記的pCambia330

2、1中，構(gòu)建了Ubiquitin啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的帶有bar基因選擇標(biāo)記的植物高效表達(dá)載體pUBGO，將此質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌（Agrobacterium tumefaciens）EHA105中，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)化粳稻品種中花11號(hào)成熟胚來(lái)源的愈傷組織，并由篩選出的抗Basta的抗性愈傷組織分化再生植株。對(duì)所得的轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和葉片噴涂除草劑Basta鑒定，表明GO基因已經(jīng)整合到受體基因組中。利用淀粉-KI染色和超氧鈦法測(cè)定轉(zhuǎn)基因

3、水稻葉片中過(guò)氧化氫（Hydrogen peroxide，H2O2），證明GO基因表達(dá)產(chǎn)生的葡萄糖氧化酶已經(jīng)在水稻中發(fā)揮功能。對(duì)所得的轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行抗氧化酶SOD、POD和APX活性測(cè)定，也表明GO基因的表達(dá)增強(qiáng)了抗氧化酶的活性。由于過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的植物防衛(wèi)反應(yīng)沒有種屬專一性，因此，轉(zhuǎn)基因植株將會(huì)對(duì)多種病原菌產(chǎn)生抗性。 在本項(xiàng)研究的載體構(gòu)建中選用bar基因?yàn)檫x擇標(biāo)記，便于轉(zhuǎn)基因植株的田間篩選以及將GO基因通過(guò)有性雜交的方法轉(zhuǎn)育到其它