草魚腸道優(yōu)勢(shì)固有菌的鑒別及產(chǎn)纖維素酶菌株的篩選.pdf

1、草食性的草魚擁有著強(qiáng)大的分解水草的能力，同時(shí)，有研究報(bào)道在草魚腸道中檢測(cè)到纖維素酶活性或者產(chǎn)纖維素酶細(xì)菌。目前，對(duì)于草魚腸道內(nèi)的產(chǎn)纖維素酶細(xì)菌有哪些，這些細(xì)菌是固有共生細(xì)菌還是因?yàn)閿z食等其它原因產(chǎn)生的等問題，并不是很清楚。甄別宿主體內(nèi)細(xì)菌是固有細(xì)菌還是外來細(xì)菌，是了解細(xì)菌和宿主之間相互關(guān)系的前提。 通過對(duì)16srDNA文庫的隨機(jī)序列測(cè)序，本研究調(diào)查了空腹草魚腸道以及其他有著連接的組織（膽囊和肝胰臟）中的細(xì)菌多樣性和菌群豐度。結(jié)果

2、表明，（1）草魚腸道組織的細(xì)菌群落組成以氣單胞菌（Aeromonas）為主，其次依次為摩根菌（Morganella）、假單胞菌（Pseudomonas）和耶爾伸菌（Yersina），普羅威登斯菌（Providencia）、弧菌（Vibrio）和不動(dòng)桿菌數(shù)量（Acinetobacter）相對(duì)較少；草魚膽囊以氣單胞菌（Aeromonas）為主，肝胰臟以氣單胞菌（Aeromonas）和假單胞菌（Pseudomonas）為主。（2）鑒定出腸道中

3、細(xì)菌28株、膽囊中10株和肝胰臟中19株，以上菌株均歸屬于變形桿菌的gamma亞群，分屬于不同的8個(gè)細(xì)菌屬。（3）在膽囊、肝臟和腸道均有分布的相同菌株，共有3株，其中2株隸屬于氣單胞菌和1株隸屬于假單胞菌。除此之外，膽囊和肝臟中相同菌株還有1株變形桿菌、2株氣單胞菌和1株假單胞菌；膽囊和腸道中相同菌株還有2株氣單胞菌、1株假單胞菌和1株摩根菌；肝臟和腸道中相同菌株還有1株氣單胞菌、1株假單胞菌和1株摩根菌；（4）這些共同擁有的細(xì)菌我們稱

4、之為共生細(xì)菌，在研究中一共找到了10種共生細(xì)菌，占了55.33％。這10種共生細(xì)菌在腸道中都能檢測(cè)到，在膽囊中有7種，肝胰臟中有6種。（5）這10種共生細(xì)菌都隸屬于三種細(xì)菌基因：氣單胞菌，假單胞菌和摩根菌。其中氣單胞菌數(shù)量最多，占28.38％，其次為摩根菌占20.78％，假單胞菌占6.17％。在這些細(xì)菌中，Morganellasp，JB-T11，Aeromonasveronii，和Aeromonassobria這三種細(xì)菌數(shù)量最多，分別占

5、了17.08％，12.35％和8.64％。 另外采用PCR-DGGE分子生物學(xué)策略以分析16SrDNA特征序列對(duì)細(xì)菌類群進(jìn)行分析，共鑒定出草魚腸道中的13種細(xì)菌。草魚腸道組織中的細(xì)菌都隸屬于以下這五種細(xì)菌基因：氣單胞菌（Aeromonas），假單胞菌（Pseudomonas），耶爾森菌（Yersina），希瓦菌（Shewanella），沙門菌（Salminella）。其中，氣單胞菌為占優(yōu)勢(shì)的細(xì)菌，占了46.13％，其次為假單胞菌

6、，占了30.77％。耶爾森菌，希瓦菌，沙門菌各占7.69％。 運(yùn)用改良過的剛果紅培養(yǎng)基篩選草魚腸道中的產(chǎn)纖維素酶細(xì)菌，得到產(chǎn)纖維素酶細(xì)菌的單克隆66個(gè)。其中透明水解圈D（mm）/菌落直徑d（mm）大于等于5的產(chǎn)纖維素酶細(xì)菌有19個(gè)。運(yùn)用16SrDNA分子技術(shù)分析這19個(gè)細(xì)菌，得到3個(gè)不同序列和16個(gè)重復(fù)序列。其中兩個(gè)序列經(jīng)過比對(duì)鑒定為Aeromonasveronii，另一個(gè)序列經(jīng)過比對(duì)鑒定為Aeromonashydrophila

7、，這2種細(xì)菌均隸屬于氣單胞菌（Aeromonas）。這兩種細(xì)菌在草魚腸道和膽囊中都有被檢測(cè)到，說明這2種產(chǎn)纖維素酶細(xì)菌是草魚腸道中的共生細(xì)菌。Aeromonasveronii在草魚腸道中占了12.35％的相對(duì)豐度，Aeromonashydrophila在草魚腸道中占了1.23％的相對(duì)豐度。 本研究利用不依賴于細(xì)菌分離培養(yǎng)的分子鑒定技術(shù)，通過比較腸道以及與其相連接器官組織的細(xì)菌組成，確定了腸道共生細(xì)菌類群并得出了相對(duì)的種群優(yōu)勢(shì)，在