鵝源副黏病毒病單克隆抗體的制備及膠體金快速診斷試紙條的研制.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)建立了檢測鵝副黏病毒的快速夾心膠體金免疫層析測試試紙條(ICS)。全文共分為兩部分： 第一部分，制備鵝副黏病毒的單克隆抗體。采用PEG沉淀法結(jié)合SephdexG200層析柱法提純強(qiáng)毒JG04株GPMV,蛋白含量為1.283mg/mL，HA效價為29～10。提純的GPMV用于免疫小鼠和ELISA包埋；采用PEG1500進(jìn)行融合，融合率為46.5﹪；采用間接ELISA試驗(yàn)和HI試驗(yàn)雙向檢測雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體，陽性率為78.4

2、﹪；采用有限稀釋法進(jìn)行三次克隆，獲得兩株穩(wěn)定分泌抗JG04株鵝副黏病毒抗體的雜交瘤細(xì)胞株，命名為3A5、2C6。其中3A5腹水的ELISA效價為1∶51200，沒有HI效價；2C6腹水的ELISA效價為1∶6400，HI效價為27。 第二部分，制備快速夾心膠體金免疫層析檢測試紙條。采用檸檬酸鈉還原法制備膠體金；將提純的雞IgG(抗JG04株GPMV)噴涂在NC膜上，檢測線(T)；將金標(biāo)3A5作為檢測試劑，噴涂在玻璃纖維上。在加樣

3、處沾取含有GPMV的尿囊液樣品，GPMV與金標(biāo)3A5結(jié)合形成混合液，由于層析原理，混合液向上移動，在檢測線(T)上混和液中與金標(biāo)顆粒結(jié)合的GPMV與雞IgG結(jié)合，由于大量GPMV沉積在檢測線上，出現(xiàn)紅線；而如果尿囊液中不含有GPMV，檢測線上不出現(xiàn)紅線。 該試紙條不與AIV、EDSV、IBDV、IBV、GPV、CELO的尿囊液和MV、CDV發(fā)生交叉反應(yīng)，說明該試紙條有較高的特異性。用該試紙條對GPMV、孔雀源NDV毒株，鴿源ND

4、V毒株、新城疫Lasota株、雞源NDV的尿囊液進(jìn)行檢測，均為陽性。證明其不僅與GPMV發(fā)生反應(yīng)，還可以與不同易感動物源的NDV發(fā)生反應(yīng)，可以廣泛的應(yīng)用到NDV的多種易感動物的檢測。 GPMV膠體金免疫層析試紙條以免疫層析法為基礎(chǔ)，利用抗原—抗體的特性，用一種新奇的方式進(jìn)行快速診斷。由于這種方法快速、簡便，易保存，不需要專業(yè)人員和特殊儀器，大大縮短了常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測所需時間，特別適合于廣大基層單位、醫(yī)院、野外作業(yè)人員以及大批量時間