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文檔簡介
1、本實(shí)驗(yàn)建立了檢測鵝副黏病毒的快速夾心膠體金免疫層析測試試紙條(ICS)。全文共分為兩部分: 第一部分,制備鵝副黏病毒的單克隆抗體。采用PEG沉淀法結(jié)合SephdexG200層析柱法提純強(qiáng)毒JG04株GPMV,蛋白含量為1.283mg/mL,HA效價為29~10。提純的GPMV用于免疫小鼠和ELISA包埋;采用PEG1500進(jìn)行融合,融合率為46.5﹪;采用間接ELISA試驗(yàn)和HI試驗(yàn)雙向檢測雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體,陽性率為78.4
2、﹪;采用有限稀釋法進(jìn)行三次克隆,獲得兩株穩(wěn)定分泌抗JG04株鵝副黏病毒抗體的雜交瘤細(xì)胞株,命名為3A5、2C6。其中3A5腹水的ELISA效價為1∶51200,沒有HI效價;2C6腹水的ELISA效價為1∶6400,HI效價為27。 第二部分,制備快速夾心膠體金免疫層析檢測試紙條。采用檸檬酸鈉還原法制備膠體金;將提純的雞IgG(抗JG04株GPMV)噴涂在NC膜上,檢測線(T);將金標(biāo)3A5作為檢測試劑,噴涂在玻璃纖維上。在加樣
3、處沾取含有GPMV的尿囊液樣品,GPMV與金標(biāo)3A5結(jié)合形成混合液,由于層析原理,混合液向上移動,在檢測線(T)上混和液中與金標(biāo)顆粒結(jié)合的GPMV與雞IgG結(jié)合,由于大量GPMV沉積在檢測線上,出現(xiàn)紅線;而如果尿囊液中不含有GPMV,檢測線上不出現(xiàn)紅線。 該試紙條不與AIV、EDSV、IBDV、IBV、GPV、CELO的尿囊液和MV、CDV發(fā)生交叉反應(yīng),說明該試紙條有較高的特異性。用該試紙條對GPMV、孔雀源NDV毒株,鴿源ND
4、V毒株、新城疫Lasota株、雞源NDV的尿囊液進(jìn)行檢測,均為陽性。證明其不僅與GPMV發(fā)生反應(yīng),還可以與不同易感動物源的NDV發(fā)生反應(yīng),可以廣泛的應(yīng)用到NDV的多種易感動物的檢測。 GPMV膠體金免疫層析試紙條以免疫層析法為基礎(chǔ),利用抗原—抗體的特性,用一種新奇的方式進(jìn)行快速診斷。由于這種方法快速、簡便,易保存,不需要專業(yè)人員和特殊儀器,大大縮短了常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測所需時間,特別適合于廣大基層單位、醫(yī)院、野外作業(yè)人員以及大批量時間
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