豬IFN-α融合PPV VP2-PCV2 ORF2基因真核表達(dá)載體構(gòu)建及免疫原性研究.pdf

1、干擾素(interfron， IFN)是病毒或干擾素誘生劑(Interferon inducer)進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體后誘導(dǎo)宿主細(xì)胞產(chǎn)生的微量并具有廣譜抗病毒和免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性的一類細(xì)胞因子。豬α干擾素(PoIFN-α)可被用于免疫增強(qiáng)劑和豬病毒病的治療。為探索PoIFN-α作為分子佐劑對(duì)核酸疫苗的免疫增強(qiáng)作用，本研究應(yīng)用PCR技術(shù)從太湖豬肝臟基因組中擴(kuò)增得到太湖豬IFN-α基因CDS區(qū)全序列，對(duì)其進(jìn)行序列測(cè)定，然后將太湖豬IFN-α插入

2、到pCI-VP2-ORF2質(zhì)粒中，構(gòu)建了融合表達(dá)載體PCI-IFN-α-ORF2-VP2。將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染PK15細(xì)胞后運(yùn)用間接免疫熒光對(duì)PCV2的ORF2蛋白和PPVVP2蛋白進(jìn)行檢測(cè)。并以BALA/c小鼠為動(dòng)物模型，分別運(yùn)用pCI-IFN-a-ORF2-VP2、pCI-VP2-ORF2、pCI空載體、豬細(xì)小病毒滅活疫苗、豬圓環(huán)病毒亞單位疫苗通過肌注進(jìn)行免疫，并于14天進(jìn)行加強(qiáng)免疫。免疫后采集小鼠脾臟、外周血，運(yùn)用MTT比色法、流式細(xì)胞術(shù)

3、和ELISA法檢測(cè)了免疫小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化功能、外周血中CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞比例以及PCV2和PPV抗體效價(jià)。
　　 結(jié)果顯示：太湖豬IFN-α基因在編碼區(qū)具有三處突變，其中兩處錯(cuò)義突變導(dǎo)致了編碼氨基酸的改變。重組質(zhì)pCI-IFN-a-ORF2-VP2轉(zhuǎn)染PK后48小時(shí)運(yùn)用間接免疫熒光可以檢測(cè)到PCV2ORF2和PPVVP2蛋白的表達(dá)。運(yùn)用該質(zhì)粒免疫小鼠后能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答，且重組質(zhì)粒pCI-IFN-α-OR