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1、熒光定量PCR的化學(xué)原理,,水解探針的MIX,SYBR染料的MIX,SYBR染料,結(jié)合于雙鏈核酸的小溝處與雙鏈DNA結(jié)合后受激產(chǎn)生熒光在變性條件下雙鏈分開(kāi),熒光消失背景強(qiáng),非特異性較強(qiáng),SYBR染料法的擴(kuò)增曲線,Taqman探針類,水解探針-Roche cobas與ABI Taqman,Scorpions®,,,,,雜交探針檢測(cè)-羅氏專利性技術(shù),熒光定量PCR儀的光學(xué)原理,熒光染料的光學(xué)性質(zhì),ABI 7500 Re
2、al-Time PCR Systems 光學(xué)原件,熒光定量PCR的數(shù)據(jù)分析,標(biāo)準(zhǔn)曲線法 2 -△△Ct法,相對(duì)定量,標(biāo)準(zhǔn)曲線法,LogX0與循環(huán)數(shù)呈線性關(guān)系,通過(guò)已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)未知樣品Ct值,就可以在標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出未知樣品初始模板量。,優(yōu)點(diǎn):無(wú)需作標(biāo)準(zhǔn)曲線 實(shí)用適合于配對(duì)樣本的相對(duì)定量分析,2 -△△Ct法,實(shí)例,舉例-BCR/ABL1融合基因定量檢測(cè),AB
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