dna遺傳標(biāo)記

1、DNA遺傳標(biāo)記特點：1.直接反映基因特征，非推測。2.基因座位數(shù)量多，無論表達與否。3.多態(tài)性程度高，等位基因多，鑒別能力強。4.適合于陳舊的樣品，檢測能力強。5.靈敏度高，有利于微量樣品的檢測。6.易于檢測手段的自動化、標(biāo)準(zhǔn)化，重復(fù)性好。逐漸取代了蛋白質(zhì)水平的檢測方法。第一部DNA基礎(chǔ)一、DNA結(jié)構(gòu)與特征1.DNA分子結(jié)構(gòu)線性大分子基本單位為脫氧核苷酸組成堿基、脫氧核糖、磷酸差別堿基：嘌呤堿—腺嘌呤（A）與鳥嘌呤（G）。嘧啶堿—胞嘧啶

2、（C）與胸腺嘧啶（T）。結(jié)構(gòu)：堿基脫氧核糖=脫氧核苷磷酸=脫氧核苷酸2.DNA理化性質(zhì)1）DNA的變性變性（denaturation）:在一定條件下，DNA雙鏈間氫鍵斷裂，形成單鏈結(jié)構(gòu)的過程。也稱退火（annealing）。條件：A：溫度上升Tm值(meltingtemperature)50%DNA分子解鏈的溫度。與GCTA比值有關(guān)。1%GC0.4℃。B：堿性升高0.5NNaOH完全解鏈。2）DNA的復(fù)性復(fù)性（renaturation）

3、撤除變性條件后，變性的單鏈DNA根據(jù)堿基互補的原則，恢復(fù)成DNA雙鏈的過程。條件：A：溫度降低—過低易錯配。過高不易復(fù)性。B：高離子強度。3）DNA分子雜交雜交（hybridization）：來源不同的兩條DNA單鏈根據(jù)堿基互補的原則，形成雙鏈雜種DNA的過程。A：產(chǎn)生原因：DNA滑動與同源染色體不等交換。B：差別：VNTRSTR重復(fù)序列組成27bp7數(shù)十bp重復(fù)序列數(shù)目210數(shù)個10數(shù)個數(shù)百個鑒別能力高極高優(yōu)勢擴增現(xiàn)象不明顯極明顯檢測

4、靈敏度極高稍差片段總長度200500bp數(shù)千以上bpC：STR的命名：非編碼區(qū)D3S1358D3第三號染色體S單拷貝（singlecopy）1358VNTR序列的發(fā)現(xiàn)序號編碼區(qū)內(nèi)含子HumHPRTB次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因（hypoxanthinephosphibosyltransferase）2）序列多態(tài)性：DNA片段堿基排列順序的個體差別。單核苷酸多態(tài)性（singlenucleotidepolymphismSNPs）原因：堿基的置

5、換、插入、缺失。特點：多位于非編碼區(qū)，選擇壓力。數(shù)量多，11000bp，300萬二態(tài)性，2個等位基因，多態(tài)性程度較低。孤立事件，人類遺傳學(xué)意義大。第二部分DNA置備核心與關(guān)鍵腦》肺》肌肉》腎6pg細胞一、理想DNA樣品的要求1.純度RNA、蛋白質(zhì)、多糖、脂類。2.完整性DNA大分子。3.DNA量。Μg指紋圖；ngPCR；pgPCR二、經(jīng)典DNA提取法1.在弱堿和螯合劑的條件下行組織勻漿，溶解胞、核膜。2.去垢劑與蛋白酶消化蛋白，分離DN