銀耳多糖酶法提取及生物活性研究.pdf

1、銀耳別名白木耳、雪耳、菊花耳，是一種具有研究開發(fā)價(jià)值的珍貴食用菌。而銀耳多糖是銀耳中的主要活性成分，它具有提高機(jī)體免疫力、抗病毒、抗腫瘤、降血糖血脂等保健功能逐漸成為人們的研究熱點(diǎn)。但與歐美發(fā)達(dá)國(guó)家相比，我國(guó)銀耳以食用為主，對(duì)銀耳多糖的研究起步甚晚。銀耳多糖的提取存在過程復(fù)雜、提取率低、純度不高、提取成本高等問題，而國(guó)內(nèi)外對(duì)于高純度銀耳多糖的需求較大。福建省銀耳資源豐富，因此對(duì)銀耳多糖提取、分離純化展開研究，開發(fā)出一條簡(jiǎn)單高效、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠

2、的銀耳多糖提取純化工藝具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和應(yīng)用價(jià)值。本文以銀耳子實(shí)體為原料，對(duì)其多糖的提取、分離純化及生物活性進(jìn)行研究。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴干銀耳子實(shí)體經(jīng)過浸泡、修剪、瀝干、高壓、勻漿、酶解、離心、蒸發(fā)濃縮、醇沉、離心、凍干等工藝流程得到銀耳粗多糖。首先通過單因素試驗(yàn)研究高壓過程中的溫度、時(shí)間、料液比等單因素對(duì)銀耳多糖提取率的影響，并采用Box-Behnken設(shè)計(jì)對(duì)高壓此工藝進(jìn)行優(yōu)化，得出最佳的提取工藝：高壓時(shí)料液比1:9

3、0、時(shí)間120min、溫度110℃。經(jīng)過高壓、勻漿等工藝流程，酶解階段中研究纖維素酶、果膠酶、酶解時(shí)間、酶解溫度等單因素對(duì)銀耳多糖提取率的影響，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)此工藝進(jìn)行優(yōu)化，得到最佳工藝參數(shù)為：纖維素酶1.0％、果膠酶0.8%、酶解時(shí)間120min、酶解溫度是55℃，此時(shí)粗多糖的提取率高達(dá)39.28%。⑵將銀耳粗多糖進(jìn)行分離純化是研究其生物活性的前提和基礎(chǔ)。銀耳多糖的純化主要包括脫除蛋白質(zhì)、DEAE52-纖維素離子交換柱層析、Sep

4、hadex G-200凝膠柱層析、透析等步驟，得到兩種組分單一的銀耳多糖組分TFP1-1和TFP2-2。本課題以銀耳多糖中的蛋白質(zhì)脫除率和多糖損失率作為綜合評(píng)價(jià)參數(shù)，通過比較TCA法、sevage法、鹽酸法、酶法+sevage法這四種脫蛋白的效果，結(jié)果表明酶+sevage法效果最佳。在溫度65℃、pH6.5、120min、木瓜蛋白酶為1%的條件下脫蛋白，再用sevage法在此基礎(chǔ)上三次去除蛋白質(zhì)三次，蛋白質(zhì)脫除率85.1%，多糖損失率為

5、14.2%。⑶未脫蛋白的和脫蛋白的銀耳多糖均對(duì)·OH有一定的清除效果（P＜0.01），且未脫蛋白的銀耳多糖對(duì)清除?OH能力優(yōu)于脫蛋白的銀耳多糖（P＜0.01）；在清除ABTS+體系中，銀耳多糖同樣表現(xiàn)出良好的清除效果，未脫蛋白的銀耳多糖和脫蛋白的銀耳多糖對(duì)清除ABTS+的IC50分別為2.32、3.94mg/mL；而在DPPH·體系中，未脫蛋白的銀耳多糖在清除DPPH?自由基能力方面卻不及脫蛋白的銀耳多糖（P＜0.01）。接著探討銀耳多