馬氏珠母貝多糖的硫酸酯化修飾及其細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)活性的初步研究.pdf

1、目的:
　　本文以馬氏珠母貝全臟器為材料，通過酶解法提取馬氏珠母貝多糖（以下簡稱珠母貝多糖），采用氯磺酸-吡啶法對珠母貝多糖進行硫酸酯化修飾，并體外評價了珠母貝多糖及其硫酸酯化衍生物的細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)活性，同時探討硫酸酯化珠母貝多糖有效成分的構(gòu)效關(guān)系。
　　方法:
　　1采用單因素試驗，測試反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間、酯化試劑比例、酯化試劑與多糖溶液的體積比等因素對硫酸酯化珠母貝多糖的取代度DS和總糖含量的影響;在單因素試驗研究的

2、基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面分析法優(yōu)化出珠母貝多糖硫酸酯化的工藝條件。
　　2.采用DEAE-纖維素柱層析法分離純化珠母貝多糖級分;采用高效液相色譜法測定珠母貝多糖純化組分PMPS-1及其硫酸酯化多糖PMPS-1-S的相對分子量、純度;采用紅外光譜法、核磁共振光譜法對珠母貝多糖組分及其硫酸酯化衍生物進行分析。
　　3.采用MTT法體外研究小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖效果;采用中性紅法體外研究小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。
　　結(jié)果:

3、>　　1.單因素試驗結(jié)果表明，反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間、酯化試劑比例、酯化試劑與多糖溶液的體積比對取代度DS變化趨勢有顯著影響，但對總糖含量的變化趨勢影響不大。響應(yīng)面分析法結(jié)果表明，取代度DS的最優(yōu)條件是反應(yīng)溫度為70℃，反應(yīng)時間為4.6h，酯化試劑比例為1∶4，酯化試劑與多糖溶液的體積比為6∶5，在此條件下取代度DS達(dá)到1.44，總糖含量為76.41％。2.珠母貝多糖分離純化得到三個純化組分（PMPS-1，PMPS-2，PMPS-3）。PM

4、PS-1、PMPS-1-S為均一的多糖組分，且PMPS-1和PMPS-1-S的相對分子量分別為1.69×104Da,2.98×106Da。B(DS0.26)、C(DS0.42)、D(DS0.56)及E(DS1.14)這四種硫酸酯化衍生物均表現(xiàn)出多糖的特征吸收峰且它們的硫酸基取代度不同。PMPS-1、PMPS-1-S均表現(xiàn)出多糖的特征吸收峰且均為α型吡喃糖，PMPS-1-S的硫酸基團取代在C-6位置上且有兩個取代信號。
　　3.(1

5、)對小鼠脾淋巴細(xì)胞免疫活性的影響:
　　不同取代度的硫酸酯化衍生物檢測結(jié)果顯示，A(DS0.12)、B(DS0.26)、C(DS0.42)、D(DS0.56)及E(DS1.14)均具有促進淋巴細(xì)胞增殖的能力，其增殖效果能力為E＞D＞C＞B＞A;與陽性藥物ConA/LPS合用后，均能表現(xiàn)出單純增強或協(xié)同作用。PMPS-1和PMPS-1-S的結(jié)果顯示，PMPS-1、PMPS-1-S也均具有促進淋巴細(xì)胞的增殖活性，其增值效果能力為PMP

6、S-1-S＞PMPS-1;與陽性藥物ConA/LPS合用后，也均表現(xiàn)出單純增強或協(xié)同作用。
　　(2)對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞免疫活性的影響: B(DS0.26)、C(DS0.42)、D(DS0.56)、E(DS1.14)、PMPS-1及PMPS-1-S在所選劑量下幾乎均能促進小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅且具有一定的量效關(guān)系。對于吞噬中性紅能力來說，在相同的劑量條件下，E(DS1.14)和PMPS-1-S劑量組的效果最好。A(DS0.12

7、)在所選劑量下均不同程度地增強小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的能力，但無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　(1)珠母貝多糖硫酸酯化最佳工藝條件是反應(yīng)溫度為70℃，反應(yīng)時間為4.6h，酯化試劑比例為1∶4，酯化試劑與多糖溶液的體積比為6∶5，在此條件下取代度DS達(dá)到1.44，總糖含量為76.41％。
　　(2)B(DS0.26)、C(DS0.42)、D(DS0.56)及E(DS1.14)這四種硫酸酯化衍生物具有不同硫酸基取代度;