幾種植物源活性物質(zhì)的抑菌、抗病毒效果及其機(jī)理研究.pdf

1、尋找植物源活性物質(zhì)是天然產(chǎn)物農(nóng)藥研發(fā)的重要途徑。本文一方面對常用的抗病毒物質(zhì)篩選以及評價方法進(jìn)行優(yōu)化和探索，另一方面結(jié)合相關(guān)研究成果和報(bào)道，廣泛搜集可能具有抗病毒或抑菌活性的植物源物質(zhì)，研究其對煙草赤星病菌[Alternaria alternata(Freis) Keissler]和煙草花葉病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)的抑制效果，并初步探討其作用方式和機(jī)制。得到的主要研究結(jié)果如下：
　　1.以本氏煙和幾

2、種常用的植物病毒抑制劑為實(shí)驗(yàn)材料，分別將藥劑注射于煙葉的五個點(diǎn)和整片煙葉，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法接種TMV-GFP，2 d后在紫外燈下觀察并統(tǒng)計(jì)不同處理后的熒光斑面積與斑點(diǎn)數(shù)量。結(jié)果顯示，各處理組熒光強(qiáng)度均低于對照組，熒光斑的統(tǒng)計(jì)情況與 ELISA檢測結(jié)果相近，表明熒光強(qiáng)弱情況能夠大致反映葉片內(nèi)病毒含量。并且本體系對幾種病毒抑制劑的室內(nèi)評價結(jié)果與田間藥效結(jié)果基本一致，說明本文建立的2種篩選方式可以用于抗病毒物質(zhì)的活性評價和篩選。與篩選抗病毒物

3、質(zhì)常用的枯斑法和葉碟法相比，該體系不僅能夠快速評價抗病毒物質(zhì)的活性還能直觀的反映藥劑在病毒擴(kuò)散和復(fù)制過程中的作用特點(diǎn)，具有操作簡單，現(xiàn)象直觀，周期短的優(yōu)點(diǎn)。
　　2.以煙草花葉病毒為靶標(biāo)，對收集到的15種植物源物質(zhì)進(jìn)行抗病毒活性測定，經(jīng)過初篩、復(fù)篩并結(jié)合防御酶活性情況，篩選出熊果酸與4-甲氧基香豆素2種能夠降低病毒初侵染含量的活性物質(zhì)。研究其作用方式與機(jī)制，結(jié)果顯示，熊果酸與4-甲氧基香豆素能夠不同程度提高煙草中 SOD、PPO、

4、POD、CAT這幾種防御酶活性，降低煙葉中過氧化物含量；在病毒侵染前期可以降低植物細(xì)胞的膜脂過氧化程度，減輕細(xì)胞膜受損；并且能夠上調(diào)PR1、NPR1和PR2等防衛(wèi)反應(yīng)相關(guān)基因表達(dá)量，促進(jìn)病程相關(guān)蛋白的合成，從而降低病毒初侵染含量，具有保護(hù)和延緩病程的作用。體外作用研究發(fā)現(xiàn)，2種活性物質(zhì)與TMV混合1 h后，病毒粒體發(fā)生了明顯的聚集現(xiàn)象，而溶劑處理后的病毒分散均勻無聚集，其中熊果酸處理后的聚集程度較4-甲氧基香豆素更為明顯。將處理后的病毒

5、摩擦接種至本氏煙，熒光的斑點(diǎn)數(shù)量和病毒含量都有所降低，說明2種物質(zhì)能在體外直接作用病毒粒體，降低病毒的侵染活性或體內(nèi)復(fù)制水平，對病毒具有一定鈍化作用。
　　3.利用平板抑菌法，以煙草赤星病菌為靶標(biāo)，測定15種植物源物質(zhì)的抑菌活性，發(fā)現(xiàn)丁香油與丁香油酚具有較好的抑菌作用。丁香油含量為4.13％時能夠強(qiáng)效抑制赤星病菌孢子的萌發(fā)，丁香油含量為0.52%時顯著降低菌絲的生長速度，減少菌絲的生長量。進(jìn)一步研究作用機(jī)理發(fā)現(xiàn)，丁香油的作用位點(diǎn)之