MicroRNAs參與羅格列酮治療博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化.pdf

1、研究背景及目的：特發(fā)性肺纖維化（IPF）是一種病因不明的慢性、進(jìn)展性的間質(zhì)性肺疾病，目前尚無足夠的證據(jù)來支持任何特定的藥物療法的使用。因漸進(jìn)性呼吸困難和頑固性咳嗽，IPF患者的生活質(zhì)量很差。目前對(duì)其尚無有效的治療，故IPF患者一般預(yù)后較差，確診后的中位生存期為3–5年。據(jù)報(bào)道，IPF的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)在增加，但其病理生理機(jī)制尚不明確且缺乏有效治療，因此關(guān)于IPF的病理生理機(jī)制及其治療藥物一直是國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。
　　微小 RNA

2、s（miRNAs）是一類由大約19-22個(gè)核苷酸組成的非編碼RNAs，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)。異常表達(dá)的miRNAs，如 let-7d、miRNA-21、miRNA-155，在肺纖維的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。這些miRNAs對(duì)認(rèn)識(shí)肺纖維化的發(fā)生機(jī)制及臨床治療提供一種新思路，有可能成為新的治療靶點(diǎn)。
　　羅格列酮（RSG）是過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）的人工合成配體，在臨床上多用于治療2型糖尿病，是一種常見的噻唑烷二酮

3、類新型胰島素增敏劑。近年來發(fā)現(xiàn)PPARγ及其配體可參與腎、肝、肺等多個(gè)器官纖維化的發(fā)生和發(fā)展。已有研究者通過不同的技術(shù)手段明確了羅格列酮在改善肺纖維化中的效果。有報(bào)道稱PPARγ的合成配體可干擾TGF-β1/Smad信號(hào)途徑，從而抑制TGF-β1的致纖維化作用。但羅格列酮治療肺纖維化的分子機(jī)制仍不明確，需進(jìn)一步的研究。通過本實(shí)驗(yàn)可觀察到RSG在治療肺纖維化過程中，是否存在miRNAs的表達(dá)異常，這種表達(dá)變化是否與TGF-β1信號(hào)系統(tǒng)有關(guān)

4、，初步探討miRNAs是否參與了RSG治療肺纖維化的過程。
　　方法：雄性健康Wistar大鼠54只，體重在120-130g之間，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法將其隨機(jī)分為3組即對(duì)照組（Control組）、博萊霉素組(BLM組)、博萊霉素+羅格列酮組(BLM+RSG組)，每組共18只，于后兩組大鼠氣管內(nèi)一次性注入博萊霉素(5mg/kg)建立大鼠肺纖維化模型，對(duì)照組則注入等體積生理鹽水。造模24小時(shí)后給予BLM+RSG組大鼠羅格列酮（3mg/kg

5、.d）灌胃，余2組灌入等體積生理鹽水。于第7天、14天、28天3個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別于各組隨機(jī)取出6只大鼠處死，然后取右肺中葉行病理學(xué)觀察（HE染色，Masson染色）、右肺上葉取材應(yīng)用 Real time RT-PCR測(cè)定肺組織miRNA-21、miRNA-155、let-7d的表達(dá)，并利用免疫組化檢測(cè)TGF-β1的表達(dá)。采用SPSS21統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.肺組織

6、病理結(jié)果：7、14、28天，Control對(duì)照組肺泡結(jié)構(gòu)正常，存在少許膠原纖維，7天時(shí) BLM組大鼠與 Control相比肺泡炎明顯，14、28天BLM組大鼠肺纖維化程度逐漸加重，顯著高于同期Control組，證明肺纖維化模型復(fù)制成功。經(jīng)RSG治療后，BLM+RSG組大鼠肺泡炎及肺纖維化程度較同期BLM組明顯減輕。
　　2.Real time RT-PCR結(jié)果：7、14、28天，BLM組 miRNA-21及miRNA-155的表達(dá)

7、水平較Control組顯著增加，let-7d的表達(dá)水平較 Control組顯著減少；經(jīng) RSG治療后 BLM+RSG組miRNA-21及 miRNA-155的表達(dá)較同一時(shí)間點(diǎn) BLM組顯著減少，let-7d的表達(dá)水平較同期的Control組顯著增加。
　　3.免疫組化結(jié)果：7、14、28天，BLM組TGF-β1表達(dá)水平與Control組相比明顯升高；經(jīng)RSG治療后BLM+RSG組TGF-β1表達(dá)水平均較同一時(shí)間點(diǎn)的BLM組下調(diào)。<

8、br>　　4.TGF-β1與miRNAs相關(guān)分析：BLM組及BLM+RSG組在7、14、28天3個(gè)時(shí)間點(diǎn)上miRNA-21及miRNA-155的表達(dá)量均與TGF-β1呈正相關(guān)，而let-7d的表達(dá)量與TGF-β1呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.羅格列酮可以減輕博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化。
　　2.在羅格列酮治療肺纖維化過程中，miRNA-21及miRNA-155的表達(dá)上調(diào),let-7d表達(dá)下調(diào)。
　　3.羅格列酮