卡托普利抗博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化的作用和機(jī)制研究.pdf

1、目的：肺纖維化(Pulmonary fibrosis,PE)是一組由多種病因引起的以肺間質(zhì)炎癥,進(jìn)行性纖維組織增生、細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積,肺組織結(jié)構(gòu)破壞紊亂,最終導(dǎo)致肺纖維化的疾病,預(yù)后較差.目前臨床上廣泛使用的糖皮質(zhì)激素和細(xì)胞毒類藥物治療,效果不理想,而且副作用大.尋求有效的治療方法是當(dāng)前研究的熱點(diǎn).卡托普利通過減少血管緊張肽Ⅱ的生成發(fā)揮控制血壓和調(diào)節(jié)水鹽代謝、抑制細(xì)胞增殖和局部組織纖維化的作用,臨床主要用于高血壓病、心力衰竭、心肌纖維

2、化和腎纖維化的治療.它對(duì)肺纖維化的作用,國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少.本研究通過博萊霉素肺纖維化模型,用卡托普利進(jìn)行治療,并與地塞米松治療作對(duì)比,旨在探討卡托普利對(duì)肺纖維化的治療作用及可能的機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù). 方法：64只雄性Sprague-Dauley大鼠,購(gòu)自溫州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,體重180-220g,隨機(jī)分為4組:對(duì)照組(N)16只,予生理鹽水氣管內(nèi)注入;博萊霉素模型組(M)16只,氣管內(nèi)一次性注入含博萊霉素的生理鹽水(0

3、.5mg/kg);卡托普利治療組(K)16只,造模方法同M組,造模后次日起每天經(jīng)胃管灌服卡托普利片(60mg/kg.d)1次;地塞米松組治療組(D)16只,造模同模型組,造模后次日起每天經(jīng)胃管灌服地塞米松片(0.375mg/kg.d)1次;N,M組每天經(jīng)胃管灌服等量的生理鹽水.手術(shù)當(dāng)天為第0天,各組大鼠分別于第14、28天麻醉,頸動(dòng)脈放血處死8只,頸動(dòng)脈取血標(biāo)本制備血漿1ml用于檢測(cè)AngⅡ含量;開胸取肺,右下肺4﹪多聚甲醛固定、石蠟包

4、埋,用于病理觀察;右中上肺-70℃冰箱低溫保存,用于RT-PCRTGF-β 1mRNA測(cè)定;左肺-70℃冰箱低溫保存,用于羥脯氨酸、超氧化物歧化酶、丙二醛測(cè)定.采用HE染色、Masson染色行肺泡炎、肺纖維化程度分級(jí);堿水解法測(cè)定肺組織羥脯氨酸濃度;DTNB法測(cè)定肺組織SOD含量、硫代巴比妥酸法測(cè)定肺組織MDA含量;采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)肺組織TGF-β 1mRNA的表達(dá). 結(jié)果：1.肺組織HE、Masson染色結(jié)果

5、:對(duì)照組未見明顯病變;模型組第14天可見肺泡炎及輕度肺纖維化;第28天肺纖維化程度明顯加重而肺泡炎減輕.模型組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)肺泡炎和肺纖維化程度均較對(duì)照組重,具有顯著性差異(P<0.01).而卡托普利治療組與模型組比較,兩個(gè)時(shí)相點(diǎn)有著同一規(guī)律,但程度較輕,有顯著性差異(P<0.01);與地塞米松治療組比較無顯著性差異(P>0.05). 2.肺組織羥脯氨酸(HYP)含量測(cè)定:模型組、卡托普利治療組和地塞米松治療組大鼠肺組織HYP含量隨

6、造模時(shí)間延長(zhǎng)而增高,而卡托普利治療組HYP含量成低水平增高趨勢(shì),與地塞米松治療組類似.兩組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)比模型組低,均有顯著性差異(P<0.01). 3.血漿AngⅡ濃度測(cè)定:第14天模型組、卡托普利治療組、地塞米松治療組大鼠血漿中AngⅡ含量均較對(duì)照組明顯增高,隨造模時(shí)間延長(zhǎng)而回降,第28天K組恢復(fù)到接近正常水平(P>0.05),而模型組和地塞米松治療組仍明顯高于對(duì)照組,差異具顯著性(P<0.01).地塞米松治療組與模型組水平相當(dāng)

7、,兩組差異無顯著性.而卡托普利治療組較模型組和地塞米松治療組低,差異有顯著性(P<0.01). 4.肺組織超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量測(cè)定:模型組、卡托普利治療組和地塞米松治療組大鼠肺組織SOD含量第14天明顯降低,與對(duì)照組比較差異有顯著性(P<0.01),但隨造模時(shí)間延長(zhǎng)肺組織SOD含量明顯回升,第28天卡托普利治療組、地塞米松治療組和對(duì)照組三組組間比較均無顯著性差異(P>0.05);而模型組回升不明顯,仍明

8、顯低于對(duì)照組(P<0.01).模型組、卡托普利治療組和地塞米松治療組大鼠肺組織MDA含量第14天均高于對(duì)照組(P<0.01),但隨造模時(shí)間延長(zhǎng)呈回降趨勢(shì),第28天卡托普利治療組和地塞米松治療組回降至對(duì)照組水平,三組組間比較均無顯著性差異(P>0.05);而模型組回降不明顯,仍明顯高于對(duì)照組(P<0.01).而卡托普利治療組與地塞米松治療組比較無顯著性差異(P>0.05). 5.TGF-β1 mRNA的RT-PCR結(jié)果:TGF-β

9、1的mRNA在對(duì)照組有低表達(dá);而模型組第14天肺組織的TGF-β1 mRNA明顯升高,第28天有所下降,但均明顯高于對(duì)照組(P<0.01).卡托普利治療組和地塞米松組與模型組有同一規(guī)律,雖然兩組TGF-β1 mRNA表達(dá)較對(duì)照組強(qiáng)(P<0.01),但明顯較模型組弱(P<0.01).同時(shí)卡托普利治療組TGF-β1 mRNA表達(dá)較地塞米松組更弱,且差異有顯著性(P<0.05)。 結(jié)論：1.本實(shí)驗(yàn)成功復(fù)制了博萊霉素誘導(dǎo)大鼠肺纖維化模型